基因敲入（KI）

简介

基因敲入（knock in）是指将外源基因替换或整合到小鼠基因组目标位点，人源化小鼠模型就是利用人类基因替换小鼠内源基因。

CRISPR/CAS9介导基因敲入是指sgRNA与Cas9蛋白相结合形成核糖体蛋白复合物，引导Cas9蛋白特异性切割目标位点，DNA双链断裂后，细胞内修复机制被激活，在外源DNA模板（donor）存在的条件下，同源重组修复（HDR）发生，外源基因整合至小鼠基因组。

基因敲入（KI）包括：

• 基因片段的替换
• 基因插入
• 人源化小鼠构建

1、小DNA片段插入

通过测序确认：目的片段成功插入获得阳性小鼠。