公司产品

RNA FISH常规试剂盒

FISH(Fluorescence In Situ Hybridization )是一种利用直接法荧光基团标记或间接法生物素等标记的寡聚核苷酸探针

产品描述

原理:FISH(Fluorescence In Situ Hybridization )是一种利用直接法荧光基团标记或间接法生物素等标记的寡聚核苷酸探针,与组织细胞中的核酸序列(DNA/RNA )按照碱基互补原则形成靶基因与探针的杂交体,经荧光显微镜下显影目标信号,即可对测定的核酸序列进行相对定性、定量及定位分析。

应用:可以在组织、细胞或染色体等水平对DNA或RNA进行定性、定位或定量分析的实验技术。广泛应用于科学研究与疾病诊断




效果承诺

序列正确,符合设计原则,质量(偏差±10%)和纯度达标(单链1830bp HPLC纯化鉴定 95%±5%),如需质谱鉴定及报告,费用另计100/条。

探针mix(≥3):对于lncRNAmRNA,无效可以免费重新合成一次或退票退款或做预付款,如果重新合成需款到发货,如果再次无效,则不再免费重合;但是cirRNA不保证效果。

l fish 探针试剂盒:对于lncRNAmRNA,无效可以免费重新合成一次或退票退款或做预付款,如果重新合成需款到发货,如果再次无效,则不再免费重合;但是cirRNA不保证效果。

单条探针和miRNA试剂盒:不保证效果


备注:

1. 效果保证仅限人源鼠源,其他物种不做效果保证,清晰度与样品、质量、RNA丰度、切片及拍照设备有关,故不做清晰度效果保证。

2. 以上无效需经过公司确认,如果验证符合公司出货标准,客户仍需支付相关费用。

3. 所有阳性或有效性确认,不同细胞表达调控不同,所以只需一种细胞或样品确认效果即可,不保证所有细胞或样品一定符合阳性结果。

4. 所有实验仅供科研使用。



功能介绍与实验实例

检测各种RNA寡合苷酸FISH探针案例




3个内参fish探针结果与分析

3个基因(U6/18S/β-actin )探针荧光照片,这3个基因可以作为后续miRNA和mRNA的阳性对照。



靶基因 H2基因RNA fish结果与分析

进步实验针对H2基因基因、17号染色体重复区、分别设计了长短寡合苷酸序列,同时为了排除非特异oligo结合,我们设计了长短寡合苷酸阴性对照序列。




阴性对照fish探针结果与分析





靶基因H2基因 RNA fish结果与分析





寡核苷酸探针优点

1、分子量小其序列复杂度低,杂交时间比克隆探针节省10倍
2、短探针碱基的错配能降低杂交体的Tm值,可识别SNP靶序列变化
3、可直接标记多种基团标签、合成时间短、大量合成相对价格低廉
4、寡核苷酸探针序列长度可选范围灵活,可以满足多种基因形式检测
5、筛选序列和/或选择相对长的序列亦可设计出非常特异的寡核苷酸探针

吉玛FISH探针优点

1.安全、快速、灵敏度高;探针能较长时间保存; 
2.可用于多种基因形式检测分析;可以进行时、空、量多维度分析; 

3.可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。 



使用方法

研究方案流程

 

1、对目的基因序列进行分析,通过专业软件预测探针序列;

2、设计探针与同物种其他基因进行比对 ,尽可能排除非特异性

3、 选取特异序列验证(1>3个);

4、组织切片(5-10um,脑组织8-12um);细胞爬片制备;

5、对探针进行荧光标记和特殊修饰合成;

6、设置相应的实验对照组,包括阳性和阴性对照

7、相关反应试剂配制,优化核酸探针杂交程序

8、实验结果拍照结果分析,出具报告组装相关试剂盒


实验基本流程

 

玻片的预处理

Ø 玻片清洗,硅化处理 

Ø 黏附剂涂片APES/APTES (3-氨基丙基)三乙氧基硅烷 

荧光探针的选择和标记

Ø 对探针进行荧光标记(FAMCY3CY5)和特殊修饰合成;

Ø 设置相应的实验对照组,包括阳性和阴性对照

样品处理

Ø 细胞爬片固定,组织切片(冰冻-复水和石蜡-脱蜡,及蛋白酶处理)

Ø 变性:50~80

Ø 杂交:探针工作浓度5-50ug/ml,孵育,洗涤,

Ø DAPI染核,封片,避光4度保存

l 实验结果拍照结果分析,出具报告组装相关试剂盒


细胞爬片

成分

容量(50 tests)

储存

运输方式

Buffer A

30μl

室温

冰袋,泡沫盒低温运输

Buffer B

6 ml

室温

Buffer C

8 ml

室温

Buffer D

50μl

室温

DEPC水

6 ml

-20℃

DAPI

15μl

-20℃

目的基因探针-1

2OD

-20℃

阴性对照探针

1OD

-20℃

阳性对照探针

1OD

-20℃


石蜡切片

成分

容量(50 tests)

储存

运输方式

Buffer A

10 ml

室温

冰袋,泡沫盒低温运输

Buffer B

10 ml

室温

Buffer C

14 ml

室温

Buffer D

8 ml

室温

蛋白酶K

20μl

-20℃

DEPC水

6 ml

-20℃

DAPI

25μl

-20℃

目的基因探针-1

2OD

-20℃

阴性对照探针

1OD

-20℃

阳性对照探针

1OD

-20℃


冰冻切片

成分

容量(50 tests)

储存

运输方式

Buffer A

10 ml

室温

冰袋,泡沫盒低温运输

Buffer B

10 ml

室温

Buffer C

14 ml

室温

Buffer D

8 ml

室温

蛋白酶K

20μl

-20℃

DEPC水

6 ml

-20℃

DAPI

25μl

-20℃

目的基因探针-1

2OD

-20℃

阴性对照探针

1OD

-20℃

阳性对照探针

1OD

-20℃

产品说明书

《RNA FISH 试剂盒(细胞爬片)说明书》: https://www.genepharma.com/pdf/index.php?id=113 《RNA FISH 试剂盒(石蜡切片)说明书》: https://www.genepharma.com/pdf/index.php?id=111 《RNA FISH 试剂盒(冰冻切片)说明书》:https://www.genepharma.com/pdf/index.php?id=110

相关文献

1. Cao MX, Zhang WL, Yu XH, Wu JS, Qiao XW, Huang MC, Wang K, Wu JB, Tang YJ, Jiang J, Liang XH, Tang YL. Interplay between cancer cells and M2 macrophages is necessary for miR-550a-3-5p down-regulation-mediated HPV-positive OSCC progression. J Exp Clin Cancer Res. 2020 Jun 3;39(1):102.

2. Dong W, Bi J, Liu H, Yan D, He Q, Zhou Q, Wang Q, Xie R, Su Y, Yang M, Lin T, Huang J. Circular RNA ACVR2A suppresses bladder cancer cells proliferation and metastasis through miR-626/EYA4 axis. Mol Cancer. 2019 May 17;18(1):95.

3. Wang Y, Luo W, Huang L, Xiao J, Song X, Li F, Ma Y, Wang X, Jin F, Liu P, Zhu Y, Kitazato K, Wang Y, Ren Z. A novel lncRNA linc-AhRA negatively regulates innate antiviral response in murine microglia upon neurotropic herpesvirus infection. Theranostics. 2021 Sep 21;11(19):9623-9651.

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