公司产品

普通siRNA

吉玛普通的siRNA oligo均由HPLC纯化,价格便宜,质量上乘。

产品描述

吉玛普通的siRNA oligo均由HPLC纯化,价格便宜,质量上乘。研究者只需用包装盒内的通用缓冲溶液稀释后即可用本公司的RNAi-Mate转染试剂盒进行后续实验。

本公司可根据客户提供的每条基因设计四个靶点的siRNA。即可单独使用又可随意组合,以“siRNA Pool”形式提高抑制效率。


目录号 产品名称 规格 纯化方式 价格 交货期限
A01001 普通siRNA 2 OD HPLC ¥350 6个工作日
A01002 普通siRNA 3 OD HPLC ¥430 6个工作日
A01003 普通siRNA 4 OD HPLC ¥500 6个工作日
A01004 普通siRNA 5 OD HPLC ¥600 6个工作日
A01005 普通siRNA 6 OD HPLC ¥700 6个工作日
A01006 普通siRNA 7 OD HPLC ¥800 6个工作日
A01007 普通siRNA 8 OD HPLC ¥900 6个工作日
A01008 普通siRNA 9 OD HPLC ¥1,000 6个工作日
A01009 普通siRNA 10 OD HPLC ¥1,100 6个工作日
A01010 普通siRNA 25 OD HPLC ¥2,500 6个工作日
A01011 普通siRNA 50 OD HPLC ¥4,800 6个工作日
A01012 普通siRNA 100 OD HPLC ¥6,000 8个工作日
A01013 普通siRNA 250 OD HPLC 询价 
询问
A01014 普通siRNA 500 OD HPLC 询价 
询问
A01015 普通siRNA 1250 OD HPLC 询价 询问
A01016 普通siRNA 2500 OD HPLC 询价 询问

本公司提供的siRNA相关产品直接作用于靶基因mRNA,因此我们建议您在收到我们的相关产品后先进行实时定量PCR检测,以确定靶基因mRNA表达水平的变化,进而直接确认我们合成或构建的siRNA产品是否有效。

备注:保证序列设计符合设计原则,保证序列合成和订单要求一致,保证质量和纯度达到共同保证要求,不保证干扰效果。非承诺质量问题,无效也需付款

所有产品仅限用于科研实验,仅针对细胞水平,体内效果由于影响因素较多,不做任何体内效果保证。



功能介绍与实验实例

siRNA Real-Time PCR结果分析

对于RNAi实验而言,我们通常需要知道的是某一特定细胞在导入siRNA前后某一特定基因的表达变化情况来判断siRNA起到了Gene Knockdown作用。应用荧光定量PCR的方法,可以通过两种途径来实现上述判断,一是测定特定细胞在导入siRNA前后某一特定基因mRNA数量的变化,即为绝对定量;二是通过检测特定基因与某一管家基因在在导入siRNA前后相对表达情况的变化,即为相对定量。通常采用相对定量的方法来检测siRNA的Gene Knockdown作用。

1.Real-Time PCR 实验设计

Real-Time PCR实验设计时应包括实验组(导入siRNA),阴性对照(Negative Control)和Mock Transfaction三组。每组至少三个重复。各组同时检测目标基因和管家基因的Ct值。下例中以GAPDH为管家基因。



2.Real-Time PCR得到siRNA导入前后目标基因和管家基因的Ct值

各组重复实验的Ct值差异不能过大;一般地,重复实验Ct值差异在1以内是可以接受的。



实验组 阴性对照(NC) Mock Transfection
Target Gene GAPDH Target Gene GAPDH Target Gene GAPDH
30.40 23.63 24.21 22.66 26.21 24.60
30.35 23.40 24.60 22.56 26.15 24.31
30.41 23.52 24.66 22.48 26.35 24.72


3.Real-Time PCR数据分析

以Mock Tansfection为对照(Calibrator),管家基因为Normalizer,ΔΔCt=(Ct目的基因-Ct管家基因)实验组-( Ct目的基因- Ct管家基因)对照

Target Gene GAPDH ΔCt ΔΔCt Target Gene
Average Ct Average Ct Target Gene–GAPDH ΔCt–ΔCt, Mock Rel. to Mock
Mock 26.24±0.10 24.54±0.21 1.7±0.21 0.00±0.21 1.0(1.16-0.86)
实验组 30.39±0.09*1 23.51±0.15*2 6.88±0.17*3 5.18±0.17 0.027(0.0240.031)
NC 24.49±0.24 22.56±0.09 1.93±0.25 0.23±0.25 0.85(0.71-1.01)
注:*1 为同一样本重复实验的Ct值的标准偏差,可用Excel 计算得到; 
*2 计算公式为 ,例如 =0.17
*3 计算公式为2△△Ct+S 和2△△CtS,S为△△Ct的标准偏差,例如 2(2.5+0.10) =5.3


使用方法



A.siRNA转染的方法

哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法(例如,显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面:转染试剂的用量、siRNA的用量、转染时的细胞密度、转染时的操作顺序、细胞与转染试剂/siRNA复合物的温浴的时间


B.Lipofectamin2000 转染试剂

选择最适合的转染试剂和转染条件,往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000适用于核酸的体内和体外操作,可应用于DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA的转染,也可应

用于DNA/siRNA的共转染操作;是一种新型的高效siRNA转染试剂。


Lipofectamin2000的应用领域:

1、原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
2、siRNA高通量转染试验
3、DNA转染;DNA和siRNA的共转染
4、核酸(siRNA、DNA、RNA)的体内导入试验
5、贴壁细胞和悬浮细胞转染


Lipofectamin2000 的特点: 

1、不必更换培养基,操作简便易行,可在半小时内完成操作
2、在含血清培养基中也能表现高转染效率
3、细胞毒性低;适用细胞广泛
4、即用型试剂,可在含有抗生素的完全培养基中转染
5、基于脂质的转染试剂,确保没有RNAse活性
6、可介导siRNA高转染细胞及体内siRNA的高效导入


C. Lipofectamin2000适用的细胞类型

Lipofectamin2000转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染如:HeLa(人颈部癌细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎肾细胞),SVRbag4细胞等。


D.转染前细胞培养

在细胞板上培养细胞时,应使细胞汇合在24小时内达到70-90%。


E.合适的lipofectamin2000用量

合适的siRNA(DNA):lipofetamin2000比例对核酸的高效转染有重要影响;我们推荐的DNA:lipofetamin2000为1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000为1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情况下,此范围内都可获得高的转染效率。



F.贴壁细胞转染程序

选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。

1、转染前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上, 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM(或Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
4、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μllipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;

5、将稀释好的siRNA和RNAi-Mate试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
6、将100μl siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中,来回轻柔摇晃细胞培养板板。
7、 细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  


G.悬浮细胞转染程序

1、转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。
2、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清的培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
3、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μl lipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;
4、将稀释好的siRNA和lipofectamin试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
5、再加入400μL细胞悬浮液(细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间)。
6、细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  



H.DNA和siRNA共转染细胞

1、在转染的前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上,0.5 mL含FBS和抗生素的细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞密度,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在100μL的无血清的培养基中稀释20pmol siRNA和0.2μg DNA,加入2μl lipofectamin试剂,充分混合,放置20分钟,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin复合物。
4、将siRNA/ DNA/lipofectamin复合物加入培养基中,轻轻混匀。
5、细胞在37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它步骤。


I.siRNA体内导入方法

1、适量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的无菌水中,轻轻混匀,因为注射液体积有限,建议采用高浓度的siRNA或DNA,一般DNA为2μg /μL、siRNA为10μg /μL。
2、取适量的DNA、siRNA或siRNA\DNA复合物与lipofectamin混合。例如,在1#管中加入0.5μL的DNA(1μg)和0.5μL的siRNA(5μg),在2#管中加入0.55μL的lipofectamin(24μg)和0.45μL不含RNA酶的无菌水中,将1#管中的溶液加入2#管中,在室温下温育30分钟,以形成siRNA/DNA-lipofectamin复合物。
3、制备的siRNA/DNA-lipofectamine复合物可用于体内导入siRNA、DNA或siRNA\DNA。


产品说明书

相关文献

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目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类:

1. RNA干扰研究工具
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