公司产品

Agomir及Antagomir

antagomir是根据microRNA成熟体序列设计,经过特殊标记与化学修饰的单链小RNA,是专门用于抑制内源性microRNA的高效阻断剂。

产品描述

miRNA  miR-DownTM  antagomir 及miR-UPTM agomir 产品

Agomir是经过特殊标记和化学修饰的双链小RNA,通过模拟内源性的miRNA来调节靶基因的生物学功能。吉玛公司依靠领先的核酸化学合成技术,推出miRNA mimics、inhibitor的升级产品,miRNA agomir和antagomir.为您提供更经济的实验方案,更轻松的实验操作,更完美的实验结果。
 
antagomir 和agomir 具有如下优点: 

1、与普通miRNA inhibitor和mimics相比,antagomir 和agomir与细胞膜亲和力更高,细胞转染实验转染试剂用量显著减少。

2、特别适合动物体内干扰实验.并且在体内实验中具有更高的稳定性和抑制效果,可以采用全身注射或局部注射等多种方式给药,操作简便。

3、可富集于靶细胞,实现高效的特异性稳定干扰

4、抑制持续时间长,至少达到一周时间,干扰效果最长可持续5-6周。



antagomir 及agomir 化学修饰结构

antogimir 3’端进行胆固醇修饰,5’端两个硫代骨架修饰,3’端四个硫代骨架修饰,全链甲氧基修饰。
agomir在反义链进行修饰,3’端进行胆固醇修饰,5’端两个硫代骨架修饰,3’端四个硫代骨架修饰全链甲氧基修饰



目录号

产品名称

规格

纯化方式

价格

交货期限

B05001

miR-DownTM antagomir

2OD

HPLC

¥700

10个工作日

B05002

miR-DownTM antagomir

5OD

HPLC

¥1000

10个工作日

B04007

antagomir 阴性对照序列

2OD

HPLC

¥700

10个工作日

B06001

miR-UPTM agomir

2OD

HPLC

¥700

10个工作日

B06002

miR-UPTM agomir

5OD

HPLC

¥1000

10个工作日

B04008

agomir 阴性对照序列

2OD

HPLC

¥700

10个工作日


订购须知

1. agomir
保证序列正确、质量和纯度达标,达到共同保证要求,转染效率80%保证一种qPCR方法能检测到miRNA上调显著性差异(与对照比较),只接受一次无效投诉,需款到后发送重合产品,如果重新合成后再次无效,则不再接受投诉处理。由于靶基因调控因素较多,不保证其调控相关基因变化。


2. antagomir保证序列正确、质量和纯度达标,达到共同保证要求,但鉴于miRNA抑制剂结合后不一定降解miRNA,且没有变更序列碱基可能,故不保证qPCR方法能检测到miRNA下调显著性差异(与对照比较)。


功能介绍与实验实例


使用方法



A.siRNA转染的方法

哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法(例如,显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面:转染试剂的用量、siRNA的用量、转染时的细胞密度、转染时的操作顺序、细胞与转染试剂/siRNA复合物的温浴的时间


B.Lipofectamin2000 转染试剂

选择最适合的转染试剂和转染条件,往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000适用于核酸的体内和体外操作,可应用于DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA的转染,也可应

用于DNA/siRNA的共转染操作;是一种新型的高效siRNA转染试剂。


Lipofectamin2000的应用领域:

1、原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
2、siRNA高通量转染试验
3、DNA转染;DNA和siRNA的共转染
4、核酸(siRNA、DNA、RNA)的体内导入试验
5、贴壁细胞和悬浮细胞转染


Lipofectamin2000 的特点: 

1、不必更换培养基,操作简便易行,可在半小时内完成操作
2、在含血清培养基中也能表现高转染效率
3、细胞毒性低;适用细胞广泛
4、即用型试剂,可在含有抗生素的完全培养基中转染
5、基于脂质的转染试剂,确保没有RNAse活性
6、可介导siRNA高转染细胞及体内siRNA的高效导入


C. Lipofectamin2000适用的细胞类型

Lipofectamin2000转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染如:HeLa(人颈部癌细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎肾细胞),SVRbag4细胞等。


D.转染前细胞培养

在细胞板上培养细胞时,应使细胞汇合在24小时内达到70-90%。


E.合适的lipofectamin2000用量

合适的siRNA(DNA):lipofetamin2000比例对核酸的高效转染有重要影响;我们推荐的DNA:lipofetamin2000为1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000为1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情况下,此范围内都可获得高的转染效率。



F.贴壁细胞转染程序

选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。

1、转染前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上, 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM(或Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
4、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μllipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;

5、将稀释好的siRNA和RNAi-Mate试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
6、将100μl siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中,来回轻柔摇晃细胞培养板板。
7、 细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  


G.悬浮细胞转染程序

1、转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。
2、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清的培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
3、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μl lipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;
4、将稀释好的siRNA和lipofectamin试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
5、再加入400μL细胞悬浮液(细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间)。
6、细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  



H.DNA和siRNA共转染细胞

1、在转染的前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上,0.5 mL含FBS和抗生素的细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞密度,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在100μL的无血清的培养基中稀释20pmol siRNA和0.2μg DNA,加入2μl lipofectamin试剂,充分混合,放置20分钟,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin复合物。
4、将siRNA/ DNA/lipofectamin复合物加入培养基中,轻轻混匀。
5、细胞在37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它步骤。


I.siRNA体内导入方法

1、适量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的无菌水中,轻轻混匀,因为注射液体积有限,建议采用高浓度的siRNA或DNA,一般DNA为2μg /μL、siRNA为10μg /μL。
2、取适量的DNA、siRNA或siRNA\DNA复合物与lipofectamin混合。例如,在1#管中加入0.5μL的DNA(1μg)和0.5μL的siRNA(5μg),在2#管中加入0.55μL的lipofectamin(24μg)和0.45μL不含RNA酶的无菌水中,将1#管中的溶液加入2#管中,在室温下温育30分钟,以形成siRNA/DNA-lipofectamin复合物。
3、制备的siRNA/DNA-lipofectamine复合物可用于体内导入siRNA、DNA或siRNA\DNA。

产品说明书

相关文献

1.Guo Y, Sun W, Gong T, Chai Y, Wang J, Hui B, Li Y, Song L, Gao Y. miR-30a radiosensitizes non-small cell lung cancer by targeting ATF1 that is involved in the phosphorylation of ATM. Oncology Reports. 2017 Apr; 37(4): 1980-8.

2.Su S, Shao J, Zhao Q, Ren X, Cai W, Li L, Bai Q, Chen X, Xu B, Wang J, Cao J, Zhang W. MiR-30b Attenuates Neuropathic Pain by Regulating Voltage-Gated Sodium Channel Nav1. 3 in Rats. Frontiers in molecular neuroscience. 2017 May; 10: 126. 

3.Tan J, Yang L, Liu C, Yan Z. MicroRNA-26a targets MAPK6 to inhibit smooth muscle cell proliferation and vein graft neointimal hyperplasia. Scientific Reports. 2017 Apr; 7: 46602.

4.Tian L, Zheng F, Li Z, Wang H, Yuan H, Zhang X, Ma Z, Li X, Gao X, Wang B. miR-148a-3p regulates adipocyte and osteoblast differentiation by targeting lysine-specific demethylase 6b. Gene. 2017 Sep 5; 627: 32-9. 

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2017 Jun; 7: 4247. rk:OLE_LINK66'>Oncotarget. 2017 Apr 11; 8(15): 24949-63. 

9.Wang K, Long B, Zhou L Y, et al. CARL lncRNA inhibits anoxia-induced mitochondrial fission and apoptosis in cardiomyocytes by impairing miR-539-dependent PHB2 downregulation. Nature communications. 2014 Apr 7; 5: 3596.
10.Wang K, Long B, Zhou L Y, et al. CARL lncRNA inhibits anoxia-induced mitochondrial fission and apoptosis in cardiomyocytes by impairing miR-539-dependent PHB2 downregulation. Nature communications. 2014 Apr 7; 5: 3596.

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目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类:

1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

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