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shRNA慢病毒产品

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,

产品描述

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。

载体的技术特点

1、大大提高对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等转导效率
2、目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加
3、能够插入大的片段(~4 kb)
4、最低的细胞毒性


慢病毒表达系统

本公司使用的慢病毒表达系统,它由三部分组成:慢病毒表达载体、慢病毒包装质粒、可产生假病毒颗粒的细胞系


慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。

慢病毒介导的 siRNA活体实验用病毒液服务流程

对于活体 RNAi实验模型,吉玛公司可以为您生产高质量的病毒液,服务流程如下:
根据目的基因相关信息(序列,序列号等),利用高效的设计软件,设计 siRNA序列,针对每条目的基因,我们设计4条siRNA序列,其中1条序列为阴性对照组;
根据设计好的 siRNA序列,设计,合成两条互补的短片段的DNA;
对合成好的 DNA片段进行稀释,退火,连接到线形化处理过的载体,转化,涂平板,过夜培养;
通过 PCR的方法筛选阳性菌落,进行测序,分析测序结果;
对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒;
利用构建好的质粒做转染实验, 48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因,筛选出一条最有效的siRNA序列;
筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;
浓缩、纯化病毒液,测定滴度;
提供高质量的病毒液给客户(对于活体实验,我们建议的病毒基本单位为 1×10^9TU/ml ,对于小鼠尾静脉给药建议50~100ul/只)

Lentiviral shRNA的基因沉默效率



Lentiviral shRNA 抑制生长导管形成



Lentiviral shRNA 引起的表型变化


即用型Lentivirus shRNA构建包装服务


Lentivirus shRNA服务特点:
1、适用于原代培养细胞,难以转染的各种细胞
2、可用于制备多种稳定沉默特定基因的细胞株
3、您通过GenePharma SupersilencingTM Vector方法筛选到有效的的基因沉默靶点,如果您需要构建慢病毒载体来满足实验需求



Lentivirus shRNA载体

GenePharma Supersilencing Vector 干扰载体 
包装载体:Helper vector-I
Helper vector-II
Helper vector-III
提高包装效率和对特定细胞的感染力,提高生物安全性



品质保证

客户自己提供的序列委托我们制备的病毒颗粒,我们确保制备的病毒颗粒携带片段的正确性,确保病毒颗粒的总数和病毒颗粒的滴度达到合同规定的要求。
siRNA高效表达慢病毒载体构建
1. 通过专业设计人员的精心筛选获得欲筛选的siRNA序列。
2. 设计siRNA 正义、反义链,选择相应loop结构,加上酶切位点的目的序列。
3. 合成相应的DNA序列,然后克隆于相应的慢病毒表达载体。
4. 将载体转化到宿主菌中进行克隆、筛选,得到质粒重组体即siRNA表达载体。
5. siRNA表达载体在真核细胞中可产生siRNA,从而在细胞内产生特定基因的沉默效果。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。
本公司为您提供siRNA高效表达慢病毒载体构建服务。构建好的siRNA表达载体,可直接用于转染细胞进行RNA干扰操作。


服务要求 
1. 通过E-mail发送订单,告知选定的相应的基因信息,待构建的靶点信息。靶基因在NCBI数据库中的Gene ID、Accession No.
2. 我们可为您免费设计siRNA序列.

订购流程
1. 请用E-mail或者电话联系吉玛公司。E-mail:order@genepharma.com;Tel:021-51320195。
2. 根据客户提供的基因信息设计siRNA序列,并由客户确认。 
3. 根据客户提供的siRNA序列信息或经客户确认的siRNA序列信息设计引物。 
4. 根据所选择的慢病毒载体构建相应的siRNA表达载体。 

5. 在完成相应的试验后,我们将为您提供一套完整的实验结果,其中包括:实验操作说明、电子版的测序结果及彩图、构建好的siRNA慢病毒表达载体质粒及其穿刺保存菌、试验中所用引物等。

 

目录号 产品名称 规格 价格 交货期限
C06001 慢病毒干扰载体LV-1 (pGLVU6/GFP) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06002 慢病毒干扰载体LV-2N (pGLVU6/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06003 慢病毒干扰载体LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06004 慢病毒干扰载体LV-9N (pGLVU6/mCherry) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06005 慢病毒干扰载体LV-10N (pGLVU6/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06006 慢病毒干扰载体LV-12 (pGLVH6/luci05/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06007 慢病毒干扰载体LV-15N (pGLVH1/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06008 慢病毒干扰载体LV-16 (pGLVU6/Firefly/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06027 慢病毒干扰载体 LV-U6-Neo  50μg ¥1,000 15-25个工作日
C06028 慢病毒干扰载体 LV-U6-copGFP-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15-25个工作日
C06029 慢病毒干扰载体 LV-U6-mCherry-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15-25个工作日
C06030 慢病毒干扰载体 LV-U6-Luci17-T2A-Neo    50μg ¥1,000 15-25个工作日

吉玛基因慢病毒shRNA载体图谱



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病毒包装及滴度测定

根据客户的需要克隆目的片段或shRNA序列到所需要的慢病毒载体,然后进行细胞转染及病毒生产。


产品提供形式
1 构建好的慢病毒载体第一次包装与纯化,滴度至少为1×10^8TU/ml。
2 包装与纯化后的病毒载体续包装,每次包装滴度至少为1×10^8TU/ml。
3 如果需要大量病毒液用于动物实验,我们可提供滴度达10^10 TU/ml以上高度纯化的病毒液。
4 现有的GAPDH阳性对照病毒液,每支包装滴度至少为1×10^8TU/ml。

目录号 产品名称 规格 价格 交货期限
D01001 客户定制序列的慢病毒颗粒(提供免费设计) 一个基因一个序列 (1ml,10*8 TU/ml) ¥2,880 20-25个工作日
D01002 客户定制序列的慢病毒颗粒(提供免费设计) 一个基因一个序列 (1ml,10*9 TU/ml) ¥3,880 20-25个工作日
D02001 shRNA慢病毒超值套餐 (一个基因设计4个序列,一个阴性对照,各1ml,10*8 TU/ml) 1 套 ¥9,800 25-30个工作日
D02002 shRNA慢病毒超值套餐 (一个基因设计4个序列,一个阴性对照,各1ml,10*9 TU/ml)) 1 套 ¥13,000 25-30个工作日
D03001 慢病毒阴性对照(10*8 TU/ml) 200 ul ¥500 6个工作日
D03002 慢病毒阴性对照(10*8 TU/ml) 600 ul ¥1,200 6个工作日
D03003 慢病毒阴性对照(10*8 TU/ml) 1 ml ¥1,800 6个工作日
D03004 慢病毒阴性对照(10*9 TU/ml) 200 ul ¥1,000 6个工作日
D03005 慢病毒阴性对照(10*9 TU/ml) 600 ul ¥2,000 6个工作日
D03006 慢病毒阴性对照(10*9 TU/ml) 1 ml ¥3,000 6个工作日
D04001 筛选有效干扰慢病毒 10*8 TU/ml 询价 50-70个工作日
D04002 筛选有效干扰慢病毒 10*9 TU/ml 询价 50-70个工作日

备注:慢病毒需要干冰件运输,除江浙沪外所有地区,需要加收¥300 运费。




功能介绍与实验实例

慢病毒载体是一类重组逆转录病毒载体,由於其结构和功能的特点作为一种重要的基因转移工具被应用於 基因治疗和细胞分子生物学研究领域,区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能 力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染 神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治 疗效果。慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因 此具有广阔的应用前景。

1、 大大提高对於一些较难转染的细胞, 如原代细 胞、干细胞、不分裂的细胞等转导效率 

2、 目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加 

3、 能够插入大的片段(~ 7.5 kb) 

4、 最低的细胞毒性 

慢病毒滴度检测照片
200×荧光显微镜下观察荧光进行滴度检测96孔细胞板 10ul阴性对照病毒原液稀释10-5后,
1ml病毒原液滴度100(一个视野100个荧光细胞)×4(平均4个视野)×105(稀释倍数)×100=4×10^9 TU/ml




使用方法

慢病毒介导的 siRNA活体实验用病毒液服务流程

对于活体 RNAi实验模型,吉玛可以为您生产高质量的病毒液,服务流程如下:

1、根据目的基因相关信息(序列,序列号等),利用高效的设计软件,设计 shRNA序列,针对每条目的基因,我们设计4条shRNA序列;

2、根据设计好的 shRNA序列,设计,合成两条互补的短片段的DNA;

3、对合成好的 DNA片段进行稀释,退火,连接到线形化处理过的载体,转化,涂平板,过夜培养;

4、通过 PCR的方法筛选阳性菌落,进行测序,分析测序结果;

5、对於测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的 shRNA病毒穿梭质粒;

6、筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;

7、浓缩、纯化病毒液,测定滴度;

8、提供高质量的病毒液给客户(对於活体实验,我们提供的病毒基本单位为 1×10^8TU/ml ,这个单位为一只小鼠一次实验的平均用量)

产品说明书

相关文献

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14.Zhang C, Zhang W, Lu Y, et al. NudC regulates actin dynamics and ciliogenesis by stabilizing cofilin 1. Cell research. 2016 Feb; 26: 239-53.




订购须知

目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类:

1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

产品价格 本产品目录中标示的价格均为国内统一零售参考价,全部为人民币价格。如果大量定购时,在标准价格的基础上有不同程度的优惠。 

质量保证 凡吉玛公司的产品均有严格的质量保证。如果我们发现确实存在质量问题时,保证更换产品。如果在到货后一个月之内用户无提出异议,我们将视本产品为优良产品而不再受理投诉事宜。提出产品异议(或投诉)时,切莫在产品使用完(或快使用完)后提出,以备本公司回收产品,确认产品质量。由于订错产品而产生的退货情况,原则上由客户承担相关费用。发生投诉事宜时,公司只保证在产品价格额度范围之内酌情赔偿,恕不受理超过制品价格额度以上之部分。退款时需退还原始发票。

交通运输 吉玛公司承诺以最快捷的运送方式保证用户及时收到订购的产品。由总部直接发货,如一次订货达1,000元可免运费;不足1,000元的订货,我们根据具体情况酌情收费(上海地区免运费)。我们公司产品一般采用快递方式发货。另外对应需要特殊运输的产品(例如病毒产品等冷链运输产品)需要收取300元的特殊运输费用。


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