产品描述

原理：FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种利用直接法荧光基团标记或间接法生物素等标记的寡聚核苷酸探针，与组织细胞中的核酸序列（DNA/RNA）按照碱基互补原则形成靶基因与探针的杂交体，经荧光显微镜下显影目标信号，即可对测定的核酸序列进行相对定性、定量及定位分析。

SA放大系统中，SA（链霉亲和素蛋白）是一类四聚体蛋白，大小为66KDa，每一分子SA能够与四分子生物素进行高度特异性的结合，且两者之间的亲和力较强。应用该原理，我们将染料Cy3（或FAM）偶联到SA蛋白上，一分子SA能偶联上6个Cy3；同时在探针上标记生物素，将两者在体外进行亲和连接，大约每个SA能与4条oligo-Biotin结合，每个SA上有6个Cy3，也就是每一条探针上连接了6个Cy3，因此该方法具有一定的放大信号的作用。

应用：可以在组织、细胞或染色体等水平对DNA或RNA进行定性、定位或定量分析的实验技术。广泛应用于科学研究与疾病诊断

寡核苷酸探针优点：

1、分子量小其序列复杂度低，杂交时间比克隆探针节省10倍
2、短探针碱基的错配能降低杂交体的Tm值，可识别SNP靶序列变化
3、可直接标记多种基团标签、合成时间短、大量合成相对价格低廉
4、寡核苷酸探针序列长度可选范围灵活，可以满足多种基因形式检测
5、筛选序列和/或选择相对长的序列亦可设计出非常特异的寡核苷酸探针

吉玛FISH探针优点：

1.安全、快速、灵敏度高；探针能较长时间保存；
2.可用于多种基因形式检测分析；可以进行时、空、量多维度分析；
3.可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测；
4.荧光信号强度比传统RNA FISH的荧光强度提高3-6倍。



效果承诺：

序列正确，符合设计原则，质量（偏差 ±10%）和纯度达标（单链18～30bp HPLC纯化鉴定 95% ± 5%），如需质谱鉴定及报告，费用另计100元/条。
探针mix（≥3）：对于lncRNA或mRNA，无效可以免费重新合成一次或退票退款或做预付款，如果重新合成需款到发货，如果再次无效，则不再免费重合；但是cirRNA不保证效果。
FISH探针试剂盒：对于lncRNA或mRNA，无效可以免费重新合成一次或退票退款或做预付款，如果重新合成需款到发货，如果再次无效，则不再免费重合；但是cirRNA不保证效果。
单条探针和miRNA试剂盒：不保证效果

备注：

1. 效果保证仅限人源鼠源，其他物种不做效果保证，清晰度与样品、质量、RNA丰度、切片及拍照设备有关，故不做清晰度效果保证。
2. 以上无效需经过公司确认，如果验证符合公司出货标准，客户仍需支付相关费用。
3. 所有阳性或有效性确认，不同细胞表达调控不同，所以只需一种细胞或样品确认效果即可，不保证所有细胞或样品一定符合阳性结果。
4. 所有实验仅供科研使用。

功能介绍与实验实例

贴壁细胞 LncRNA

贴壁细胞 miRNA

贴壁细胞 circRNA

悬浮细胞 LncRNA

石蜡切片 mRNA

冰冻切片 mRNA

使用方法

研究方案流程

1、对目的基因序列进行分析，通过专业软件预测探针序列；
2、设计探针与同物种其他基因进行比对，尽可能排除非特异性
3、 选取特异序列验证（1或>3个）；
4、组织切片（5-10μm，脑组织8-12μm）；细胞爬片制备；
5、对探针进行荧光标记和特殊修饰合成；
6、设置相应的实验对照组，包括阳性和阴性对照
7、相关反应试剂配制，优化核酸探针杂交程序
8、实验结果拍照结果分析，出具报告组装相关试剂盒

实验基本流程

玻片的预处理；
1、玻片清洗，硅化处理
黏附剂涂片；APES/APTES (3-氨基丙基)三乙氧基硅烷

2、荧光探针的选择和标记
对探针进行荧光标记（FAM或CY3或CY5）和特殊修饰合成；
设置相应的实验对照组，包括阳性和阴性对照

3、样品处理
细胞爬片固定，组织切片（冰冻-复水和石蜡-脱蜡，及蛋白酶处理）
变性：50~80℃
杂交：探针工作浓度5-50ug/ml，孵育，洗涤，
DAPI染核，封片，避光4度保存
实验结果拍照结果分析，出具报告组装相关试剂盒

产品说明书

《FISH试剂盒（SA-Biotin 放大系统 细胞爬片）说明书》 https://www.genepharma.com/pdf/index.php?id=112 《FISH试剂盒（SA-Biotin 放大系统 石蜡切片）说明书》： https://www.genepharma.com/pdf/index.php?id=115 《FISH试剂盒（SA-Biotin 放大系统 冰冻切片）说明书》： https://www.genepharma.com/pdf/index.php?id=114

相关文献

1. Li J, Ma M, Yang X, Zhang M, Luo J, Zhou H, Huang N, Xiao F, Lai B, Lv W, Zhang N. Circular HER2 RNA positive triple negative breast cancer is sensitive to Pertuzumab. Mol Cancer. 2020 Sep 11;19(1):142.

2. Bi J, Liu H, Dong W, Xie W, He Q, Cai Z, Huang J, Lin T. Circular RNA circ-ZKSCAN1 inhibits bladder cancer progression through miR-1178-3p/p21 axis and acts as a prognostic factor of recurrence. Mol Cancer. 2019 Sep 3;18(1):133.

3. Zhang PF, Gao C, Huang XY, Lu JC, Guo XJ, Shi GM, Cai JB, Ke AW. Cancer cell-derived exosomal circUHRF1 induces natural killer cell exhaustion and may cause resistance to anti-PD1 therapy in hepatocellular carcinoma. Mol Cancer. 2020 Jun 27;19(1):110.

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