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公司产品
定制siRNA
公司为客户提供不同长度、不同形式，由客户自行设计的RNA oligo。（碱基数小于50 base）
| 目录号 | 产品名称 | 规格 | 纯化方式 | 价格 | 交货期限 |
| A09001 | 客户定制RNA oligo | 2 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09002 | 客户定制RNA oligo | 3 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09003 | 客户定制RNA oligo | 4 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09004 | 客户定制RNA oligo | 5 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09005 | 客户定制RNA oligo | 6 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09006 | 客户定制RNA oligo | 7 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09007 | 客户定制RNA oligo | 8 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09008 | 客户定制RNA oligo | 9 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09009 | 客户定制RNA oligo | 10 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09010 | 客户定制RNA oligo | 25 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09011 | 客户定制RNA oligo | 50 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09012 | 客户定制RNA oligo | 100 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| A09013 | 客户定制RNA oligo | 250 OD | HPLC | 询价 | 问询 |
| 目录号 | 产品名称 | 规格 | 纯化方式 | 价格 | 交货期限 |
| A04001 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8个工作日 |
| A04002 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8个工作日 |
| A04003 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8个工作日 |
| A04004 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8个工作日 |
| A04005 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8个工作日 |
| A04006 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8个工作日 |
| A04007 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8个工作日 |
| A04008 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8个工作日 |
| A04009 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8个工作日 |
| A04010 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10个工作日 |
| A04011 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12个工作日 |
| A04012 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15个工作日 |
| A04013 | 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) | 250 OD | HPLC |
询价 |
问询 |
| A04014 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8个工作日 |
| A04015 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8个工作日 |
| A04016 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8个工作日 |
| A04017 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8个工作日 |
| A04018 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8个工作日 |
| A04019 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8个工作日 |
| A04020 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8个工作日 |
| A04021 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8个工作日 |
| A04022 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8个工作日 |
| A04023 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10个工作日 |
| A04024 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12个工作日 |
| A04025 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15个工作日 |
| A04026 | 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) | 250 OD | HPLC |
询价 |
问询 |
| A04027 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8个工作日 |
| A04028 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8个工作日 |
| A04029 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8个工作日 |
| A04030 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8个工作日 |
| A04031 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8个工作日 |
| A04032 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8个工作日 |
| A04033 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8个工作日 |
| A04034 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8个工作日 |
| A04035 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8个工作日 |
| A04036 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10个工作日 |
| A04037 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12个工作日 |
| A04038 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15个工作日 |
| A04039 | 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) | 250 OD | HPLC |
询价 |
问询 |
| A04040 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8个工作日 |
| A04041 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8个工作日 |
| A04042 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8个工作日 |
| A04043 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8个工作日 |
| A04044 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8个工作日 |
| A04045 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8个工作日 |
| A04046 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8个工作日 |
| A04047 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8个工作日 |
| A04048 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8个工作日 |
| A04049 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10个工作日 |
| A04050 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12个工作日 |
| A04051 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15个工作日 |
| A04052 | 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) | 250 OD | HPLC |
询价 |
问询 |
| A04053 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8个工作日 |
| A04054 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8个工作日 |
| A04055 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8个工作日 |
| A04056 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8个工作日 |
| A04057 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8个工作日 |
| A04058 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8个工作日 |
| A04059 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8个工作日 |
| A04060 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8个工作日 |
| A04061 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8个工作日 |
| A04062 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10个工作日 |
| A04063 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12个工作日 |
| A04064 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15个工作日 |
| A04065 | 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) | 250 OD | HPLC |
询价 |
问询 |
| A04066 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8个工作日 |
| A04067 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8个工作日 |
| A04068 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8个工作日 |
| A04069 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8个工作日 |
| A04070 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8个工作日 |
| A04071 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8个工作日 |
| A04072 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8个工作日 |
| A04073 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8个工作日 |
| A04074 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8个工作日 |
| A04075 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10个工作日 |
| A04076 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12个工作日 |
| A04077 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15个工作日 |
| A04078 | 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) | 250 OD | HPLC |
询价 |
问询 |
| A04079 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 2 OD | HPLC | ￥650 | 8个工作日 |
| A04080 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 3 OD | HPLC | ￥730 | 8个工作日 |
| A04081 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 4 OD | HPLC | ￥800 | 8个工作日 |
| A04082 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 5 OD | HPLC | ￥900 | 8个工作日 |
| A04083 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 6 OD | HPLC | ￥1,000 | 8个工作日 |
| A04084 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 7 OD | HPLC | ￥1,200 | 8个工作日 |
| A04085 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 8 OD | HPLC | ￥1,300 | 8个工作日 |
| A04086 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 9 OD | HPLC | ￥1,500 | 8个工作日 |
| A04087 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 10 OD | HPLC | ￥1,600 | 8个工作日 |
| A04088 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 25 OD | HPLC | ￥3,200 | 10个工作日 |
| A04089 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 50 OD | HPLC | ￥5,800 | 12个工作日 |
| A04090 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 100 OD | HPLC | ￥9,000 | 15个工作日 |
| A04091 | 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) | 250 OD | HPLC |
询价 |
问询 |
胆固醇修饰siRNA细胞转染效率评价
人肺癌细胞A549，常规培养使用含10% FBS (Hyclone)的DMEM培养基(Gibco)(含4.0 mM L-Glutamine, 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml Streptomycin)中，37ºC 5% CO2培养箱中培养。
细胞转染
实验材料及试剂
DMEM培养基+10% FBS
无血清无抗生素的DMEM培养基(Gibco)
Trypsin-EDTA Solution (0.25% Trypsin-EDTA, Gbico)
转染试剂：Lipofectamine 2000
12孔板 （Corning）
siRNA oligo（Genepharma）：
12# 正义链，5'-FAM修饰，反义链5'-胆固醇修饰
sense: 5'-FAM-GUAUGACAACAGCCUCAAGTT -3'
antisense： 5' -Chol -CUUGAGGCUGUUGUCAUACTT -3'
13# 正义链， 5'-FAM修饰，反义链不修饰
sense: 5'-FAM-GUAUGACAACAGCCUCAAGTT -3'
antisense： 5' -CUUGAGGCUGUUGUCAUACTT -3'
步骤
1、接种细胞：对于贴壁细胞，转染前一天，将细胞消化后铺到12孔板中，接种细胞数约为5×104/孔，使转染时细胞长至30-50%融合。
2、在50µl 无血清培养基中加入20pmol的siRNA，轻轻混匀；
3、在另一份50µl 无血清培养基中加入如下表所示 Lipofectamine2000的量，混匀，室温孵育5min；
| 组别 | 1 | 2 | 3 |
| siRNA（pmol） | 20 | 20 | 20 |
| Lipo2000（μl） | - | 0.5 | 1 |
1、合并上述稀释的siRNA和Lipo2000, 轻柔混合，室温静置20min；
2、静置时，给12孔板换液，每孔加入500μl预热的无血清培养基；
3、将100 µl 转染混合物加入孔中。加完后将板轻晃摇匀；
4、37℃静置培养细胞，6hr后给细胞换液成新鲜的含10%FBS的DMEM培养基，并在荧光显微镜下观察拍照。
实 验 结 果 与 分 析
图1 胆固醇修饰与否的siRNA在不同浓度转染试剂下的转染效率（200×）
结果显示，特殊定制的胆固醇修饰siRNA 能够有效促进siRNA的细胞转染效率，显著减少转染试剂用量。
siRNA转染的方法
哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法（例如,显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。
应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面：转染试剂的用量、siRNA的用量、转染时的细胞密度、转染时的操作顺序、细胞与转染试剂/siRNA复合物的温浴的时间
A. GP-transfect-Mate 操作流程（24 孔板）
以24 孔板为例，若要检测基因沉默或者过表达效果，推荐最低RNA oligo终浓度为50nM
（DNA为0.5~1.5μg）；遵循以下操作方法可以高效地将RNA oligo或者DNA转染贴壁和悬浮培养的多种真核细胞。但是对某些特殊的细胞系和培养条件，或特殊应用等，也需要单独特别优化，请参考表 1、表2。
1. 细胞铺板
转染时细胞密度：一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率(参见表1)。然而，不同细胞的最适转染密度都不尽相同，因此在初次转染某种细胞时，可以通过预实验先确认该细胞最佳的转染密度。
2. 转染复合物的制备
（1）将 GP-transfect-Mate转染试剂放置于室温中，使用前轻轻混匀。
（2）在1.5 ml无菌离心管中加入50 μl无血清培养基或 OPTI-MEM，并添加适量的转染试剂(参见表2)，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min。
（3）同时在另一1.5 ml无菌离心管中加入50 μl无血清培养基或 OPTI-MEM，并添加适量的RNA oligo/DNA (参见表2)，用移液器轻轻混匀，室温静置5 min。
（4）将GP-transfect-Mate-培养基混合物滴加至RNA oligo/DNA-培养基混合物中，用移液器轻轻混匀，室温静置15-20 min 后，立即转染。
注：复合物尽量在60 min内使用，并且GP-transfect-Mate-培养基混合物和RNA oligo/DNA-培养基混合物的混合次序非常重要，切勿颠倒。
3. 转染过程
（1）趁静置时，给 24 孔板换液，每孔换上 0.4ml 预热的新鲜培养基。
（2）将 100 µl 转染混合物加入孔中，终体系为500 µl。加完后将板轻轻晃动以使复合物均匀分布。
（3）37℃静置培养细胞，4-6h换成完全培养基。24-72 h检测mRNA表达，48-96 h检测蛋白表达。
适用范围
293T, A549, Beas-2B,HeLa,ECA-109,Raw264.7,A375,CAFs,HCT116,HT29,LMH,NE-4C,MGC803，PC-3, PC-12，MCF-7,C6等细胞。
表 1: 贴壁细胞或悬浮细胞接种数量、培养基体积
培养器皿
每孔表面积（cm2）
每孔培养基的体积（ml）
贴壁细胞转染前一天接种密度
悬浮细胞转染当天接种密度
96 孔板
0.3
0.1
5 000±2 500
2-5×104
24 孔板
2
0.5
25000±10 000
1-2.5×105
12 孔板
4
1
50000±20 000
2-5×105
6 孔板
10
2
150000±50 000
0.4-1×106
60mm
20
4
400000±100 000
1-2.5×106
100mm
60
10
1*106±250 000
2-5×106
注：贴壁细胞培养密度取决于培养器皿的表面积，而悬浮细胞则由培养基的体积决定。
表 2 不同培养板转染DNA/RNA oligo的推荐转染条件
|
培养器皿 |
Growth Medium |
Opti-MEM/ Serum-free Mediumfor complex |
DNA 转染 |
RNA转染 |
||
|
DNA/μg |
转染试剂/μl |
RNA/pmol |
转染试剂/μl |
|||
|
96 孔板 |
100 μl |
2×10μl |
0.2 |
0.4-1 |
20 |
0.5-1 |
|
24 孔板 |
500 μl |
2×50μl |
0.6 |
1.2-3 |
40 |
1-3 |
|
12 孔板 |
1ml |
2×100μl |
1.5 |
3-6 |
80 |
3-5 |
|
6 孔板 |
2 ml |
2×200 μl |
3 |
6-12.5 |
150 |
5-8 |
|
60mm |
5ml |
2×500 μl |
6-10 |
12-20 |
300 |
10-20 |
|
100mm |
10 ml |
2×1ml |
15-30 |
30-60 |
500 |
25-35 |
注：GP-transfect-Mate转染试剂的用量在此范围内进行优化。
选择最适合的转染试剂和转染条件，往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000适用于核酸的体内和体外操作，可应用于DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA的转染，也可应
用于DNA/siRNA的共转染操作；是一种新型的高效siRNA转染试剂。
Lipofectamin2000的应用领域：
1、原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
2、siRNA高通量转染试验
3、DNA转染；DNA和siRNA的共转染
4、核酸（siRNA、DNA、RNA）的体内导入试验
5、贴壁细胞和悬浮细胞转染
Lipofectamin2000 的特点：
1、不必更换培养基，操作简便易行，可在半小时内完成操作
2、在含血清培养基中也能表现高转染效率
3、细胞毒性低；适用细胞广泛
4、即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染
5、基于脂质的转染试剂，确保没有RNAse活性
6、可介导siRNA高转染细胞及体内siRNA的高效导入
C. Lipofectamin2000适用的细胞类型
Lipofectamin2000转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染如：HeLa(人颈部癌细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎肾细胞),SVRbag4细胞等。
D．转染前细胞培养
在细胞板上培养细胞时，应使细胞汇合在24小时内达到70-90%。
E．合适的lipofectamin2000用量
合适的siRNA(DNA)：lipofetamin2000比例对核酸的高效转染有重要影响；我们推荐的DNA：lipofetamin2000为1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000为1：0.01-1：0.1（pmol：ul）一般情况下，此范围内都可获得高的转染效率。
F．贴壁细胞转染程序
选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。
1、转染前一天，4-5´104细胞接种在24孔板上， 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM（或Opti-MEM，其他培养基）细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞数量，应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他无血清培养基）无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混匀；
4、混匀lipofectamin试剂，用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM，或其他无血清培养基）稀释1μl lipofectamin试剂（DNA转染时，则加入2μllipofectamin试剂），轻轻混匀，室温放置5分钟；
5、将稀释好的siRNA和lip2000试剂混合；轻柔混匀，室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）复合物。
6、将100μl siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中，来回轻柔摇晃细胞培养板板。
7、 细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后，进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感，孵育4-6小时后，除去复合物，更换培养基。
G．悬浮细胞转染程序
1、转染的当天，收集细胞离心，用含FBS的培养基重悬。
2、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他无血清培养基）无血清的培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混匀；
3、混匀lipofectamin试剂，用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM，或其他无血清培养基）稀释1μl lipofectamin试剂（DNA转染时，则加入2μl lipofectamin试剂），轻轻混匀，室温放置5分钟；
4、将稀释好的siRNA和lipofectamin试剂混合；轻柔混匀，室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）复合物。
5、再加入400μL细胞悬浮液（细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间）。
6、细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后，进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感，孵育4-6小时后，除去复合物，更换培养基。
H．DNA和siRNA共转染细胞
1、在转染的前一天，4-5´104细胞接种在24孔板上，0.5 mL含FBS和抗生素的细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞密度，应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在100μL的无血清的培养基中稀释20pmol siRNA和0.2μg DNA，加入2μl lipofectamin试剂，充分混合，放置20分钟,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin复合物。
4、将siRNA/ DNA/lipofectamin复合物加入培养基中，轻轻混匀。
5、细胞在37℃温育24h-48h后，进行转染后的其它步骤。
I．siRNA体内导入方法
1、适量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的无菌水中，轻轻混匀，因为注射液体积有限，建议采用高浓度的siRNA或DNA，一般DNA为2μg /μL、siRNA为10μg /μL。
2、取适量的DNA、siRNA或siRNA\DNA复合物与lipofectamin混合。例如，在1#管中加入0.5μL的DNA（1μg）和0.5μL的siRNA（5μg），在2#管中加入0.55μL的lipofectamin（24μg）和0.45μL不含RNA酶的无菌水中，将1#管中的溶液加入2#管中，在室温下温育30分钟，以形成siRNA/DNA-lipofectamin复合物。
3、制备的siRNA/DNA-lipofectamine复合物可用于体内导入siRNA、DNA或siRNA\DNA。
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| LV1(U6/GFP) | |
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| 定制DNA oligo | |
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| LV15N(H1/mCherry&Puro) | |
| pGPU6/Hygro | |
| LV-U6-copGFP-T2A-Neo | |
| LV-U6-Luci17-t2a-Neo | |
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