产品描述

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒，需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞，在细胞中进行病毒的包装，包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中，离心取得上清液后，可以直接用于宿主细胞的感染，目的基因进入到宿主细胞之后，经过反转录，整合到基因组，从而高水平的表达效应分子。


载体的技术特点

1、大大提高对于一些较难转染的细胞， 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等转导效率
2、快速获得高水平的表达
3、目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加
4、将免疫反应降到最低
5、能够插入大的片段(~7.5 kb)
6、能够应用于干细胞研究
7、最低的细胞毒性

Lentiviral shRNA 抑制生长导管形成

吉玛基因shRNA慢病毒载体图谱

功能介绍与实验实例

慢病毒载体是一类重组逆转录病毒载体,由於其结构和功能的特点作为一种重要的基因转移工具被应用於 基因治疗和细胞分子生物学研究领域，区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能 力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染 神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治 疗效果。慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因 此具有广阔的应用前景。

 1、 大大提高对於一些较难转染的细胞， 如原代细 胞、干细胞、不分裂的细胞等转导效率 

2、 目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加 

3、能够插入大的片段(~ 7.5 kb) 

4、最低的细胞毒性 


慢病毒滴度检测照片

200×荧光显微镜下观察荧光进行滴度检测96孔细胞板 10ul阴性对照病毒原液稀释10-5后，
1ml病毒原液滴度100（一个视野100个荧光细胞）×4（平均4个视野）×105（稀释倍数）×100=4×10^9 TU/ml

使用方法

慢病毒介导的 siRNA活体实验用病毒液服务流程

对於活体 RNAi实验模型，吉玛可以为您生产高质量的病毒液，服务流程如下：

1、根据目的基因相关信息（序列，序列号等），利用高效的设计软件，设计 shRNA序列，针对每条目的
基因，我们设计4条shRNA序列；

2、根据设计好的 shRNA序列，设计，合成两条互补的短片段的DNA；

3、对合成好的 DNA片段进行稀释，退火，连接到线形化处理过的载体，转化，涂平板，过夜培养；

4、通过 PCR的方法筛选阳性菌落，进行测序，分析测序结果；

5、对於测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的 shRNA病毒穿梭质粒；

6、筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；

7、浓缩、纯化病毒液，测定滴度；

8、提供高质量的病毒液给客户（对於活体实验，我们提供的病毒基本单位为 1×10^8TU/ml ，这个单位为一只小鼠一次实验的平均用量）

产品说明书

相关文献

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目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类：

1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

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