产品描述

GMR-miRTM  microRNA mimics

吉玛为客户提供不同长度、不同形式的microRNA mimics，microRNA序列来自sanger miRNA数据库（http://microrna.sanger.ac.uk/sequences）
GMR-miRTM microRNA mimics的应用，利用GMR-miRTM microRNA mimics模拟活体microRNA活性来研究gain-of-function效应，筛选调控基因表达和影响细胞发育过程的miRNAs，深入研究miRNA在一些生物过程中的作用，如细胞的发育、增殖、分化和凋亡，发现和验证内源性的miRNA target。

备注：

1. 保证序列正确、质量和纯度达标，达到共同保证要求，转染效率80%保证一种qPCR方法能检测到miRNA上调显著性差异（与对照比较），只接受一次无效投诉，需款到后发送重合产品，如果重新合成后再次无效，则不再接受投诉处理。由于靶基因调控因素较多，不保证其调控相关基因变化。

2. 针对circRNA过表达，鉴于不同细胞，不同circ序列等因素都会影响环化效果，我们确保将客户指定序列构建正确（有测序结果证实，对于高GC重复序列可能会有缺失，评估后都会予以说明），对于成环效果，不予保证。如果客户检测无效且已付款，我们可以免费重新更换一次侧翼序列重新构建一次。如果再次无效则不再免费重做。目前我们成功率大约在70%左右（指环化转染过表达测序验证完全正确，如需验证费用另计：一条目的circRNA和对照转染工具细胞293T,阳性和对照及空白细胞3个样品验证环化表达效率并测序过表达组环化序列，费用5000～6000元，预付50%启动实验，无效只收预付款）。

功能介绍与实验实例

产品： GMR-miRTM microRNA mimics
目录号： B01001
规格： 2 OD
纯化方式： HPLC纯化 
产品形式: 干粉 
储存条件： 在-20℃或者-80℃条件下长期存放

质量控制 

PAGE检测： 产品是准确分子量大小且经过特殊化学分子修饰的双链mimics分子。 
HPLC纯化： 经过HPLC纯化并测定miRNA mimics,纯度》95% 
注意事项 ： RNA oligo在操作过程中，如果有外源的核酸酶存在，RNA oligo容易发生降解。在进行相关实验中，请带手套进行操作，尽量避免RNAase污染，试管，移液枪和枪头都要避免污染。收到产品后尽快储存在-20℃或-80℃环境中。 

MicroRNA mimics 的重悬：

1、在最大转速为4,000g的低速条件下离心EP管，让miRNA mimics 聚集在试管的底部。

2、轻轻的打开管盖。

3、1OD加入DEPC水125ul,配成20uM的储存液。

4、柔和地用移液枪吹打储备液5-6次。

5、根据具体用量情况分装，避免多次冻融。

6、在重新储存的时候注意密封好EP管。

7、贮存在-80℃,以备使用。

使用方法

miRNA mimics 是根据microRNA 成熟体序列设计的双链小RNA分子，用于模拟内源性成熟体miRNA序列。mimics包括一条与目标miRNA成熟体序列一致的序列，以及一条与miRNA成熟体序列互补的序列。特异的miRNA mimics 能够被导入到表达对应的miRNA细胞中，模拟microRNA的作用，或者与构建有miRNA结合位点的双荧光素报告系统结合，验证miRNA与靶基因之间的调控关系。

mRNA表达水平分析 

为了分析miRNA的上调水平，miRNA mimics 可以被转染进入细胞并通过 Northern blotting 检测，以及实时定量荧光PCR检测的方法进行检测。

靶基因表达水平分析 

通过对转染miRNA mimics 和阴性对照序列的细胞内mRNA靶基因进行实时定量荧光PCR检测和western Blotting 检测，可以检测靶基因蛋白的表达水平，验证miRNA与靶基因之间的调控关系。

miRNA3’UTR靶位点验证分析

通过将一个或多个预测的miRNA3‘UTR结合靶位点构建到报告质粒上，并将miRNA mimics 和报告质粒共转染细胞，mimics可以抑制报告质粒上的报告基因，从而可以直接检验mimics和miRNA预测结合位点之间的作用关系。我们建议使用miRNA mimics 阴性对照作为参照，阴性对照的实验浓度，转染条件与实验组相同。
转染程序 

转染效率对不同的细胞株和不同的转染试剂是不同的。
最优的转染条件还是需要通过实验来确定。我们建议优化时的miRNA mimics的浓度范围可以放宽至1-100nM之间。

 优化转染效率是使得miRNA mimics活性最大化的关键因素之一，对每种转染试剂而言，首先要确定一款合适的转染试剂，主要看从以下几点

1、转染试剂的量 
2、miRNA agomir的量 
3、转染时的细胞密度 
4、转染时的操作顺序 
5、细胞与转染试剂/siRNA复合物的接触时间

产品说明书

相关文献

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目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类：

1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

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