产品描述

产品简介
腺病毒（Adenovirus,Ad）是一种线性双链DNA病毒。腺病毒载体作为极具潜力的哺乳动物基因转移载体而得到广泛应用。吉玛可以提供过表达腺病毒载体构建及包装的产品与服务
优势
1、可感染的细胞种类多，宿主范围广，几乎可以感染所有类型的细胞。
2、感染效率高，重组腺病毒我被广泛应用于使用脂质体转染效率较低细胞的基因转导和蛋白表达。
3、包装外源基因的片段大。
4、腺病毒载体构建及包装容易操作，易于制备出滴度高的大量病毒。
5、当腺病毒感染细胞后，病毒基因组存在于细胞染色体外，不整合到细胞染色体中，避免了因整合引起的基因突变及激活致癌基因，生物安全性高。

产品描述

吉玛提供无关序列阴性对照腺病毒，阴性对照价格实惠!

shRNA腺病毒产品

吉玛shRNA合成腺病毒载体类型：

过表达腺病毒

吉玛过表达腺病毒收费标准：

对于高GC，重复序列或较长序列等特殊情况，费用需要特殊评估。

需要干冰件运输，除江浙沪外所有地区，需要加收￥300 运费。
吉玛全基因合成腺病毒过表达载体类型：

功能介绍与实验实例

靶细胞感染预实验

1) 试验前一天分别接种 3~5×10 3 个目的细胞于 96 孔培养板每孔中，所加培养基体积为 100uL。不同种类的细胞生长速度有所差异，为保证有较好的实验结果，进行病毒感染时细胞的融合度为 60~80%。因为腺病毒表达需要一定的时间，故在进行感染实验时细胞接种不宜过密。

2) 干扰预试验共分为二组，每组均有不同梯度的 MOI 值（Multiply of Infection） 。第一组为正常情况下感染，也就是在完全培养基中直接加入病毒。第二组为感染时添加 3~8 ug/mL 的 Polybrene。Polybrene 在大部分细胞中可以有效的提高感染效率。

3) 感染前为细胞换液，吸去细胞上清，按不同的分组情况加入所需的培养基 90uL，每组三个复孔。

4) 准备 3 个无菌的 EP 管，吸取 10ul 的 1×10^8 pfu/ml 的病毒（预先从-80℃取出，迅速融化，4℃低温操作）加入到第一个管子中，轻柔混匀，勿产生泡沫。同样从第一管吸取 10ul 的病毒到第二管中，混匀。再从第二管中吸取 10ul 的病毒到第三管中，混匀。这样就得到了四个不同梯度的病毒：原液，10 倍稀释，100倍稀释，1000 倍稀释。

5) 把细胞放回培养箱孵育。

6) 8~12 小时以后，请观察细胞状态。如果细胞状态与未感染组无明显差异，表明腺病毒对细胞没有明显毒性作用，请不要换液，继续培养，直至 24 小时后更换为新鲜培养基。

7) 感染 48~72 小时后，观察荧光表达情况。对于生长迟缓代谢慢的细胞，可以适当延长观察时间，中途可以换液保持细胞的良好状态。

8) 以上的操作是针对贴壁细胞设计的。悬浮细胞的区别主要在细胞的分盘上，它不需要提前一天分盘。操作时直接将细胞离心后悬浮在不同的培养基中，计数分盘后，即可加入病毒。

9)通过首次实验和重复实验，确认目的细胞的感染方法和感染参数。

正式试验

1）通过预实验可以帮助确定使用重组 Adenovirus 颗粒感染目的细胞的优化条件，如细胞接种密度，是否需要添加 Polybrene，合适的 MOI 值等参数。正式实验前，调整并保持细胞的良好状态是非常重要的。有些对 Polybrene 敏感，建议不能添加Polybrene 去增强感染效率。

2）Adenovirus 表达时间较长，但在一般代谢较旺盛的细胞（如 293T，BHK21 等）上， 病毒感染 24hrs 后可以观察到 GFP 荧光； 代谢比较缓慢的细胞 （如原代培养细胞，神经干细胞，胚胎干细胞等）GFP 蛋白表达时间较长，感染后 72-96hrs 甚至更长时间才可以观察到 GFP 荧光。感染后的细胞可以连续培养一周，通过观察 GFP 的表达时间和表达强度来确定 Adenovirus 对目的细胞的感染情况。感染后期请根据细胞生长的情况对细胞进行及时换液和传代，以保证细胞良好的生长状态。  

运输和储存

1)对于长距离运输，应先将腺病毒载体保存在-80℃，再采用全程干冰运输，以防滴度下降。

2)腺病毒载体在-80℃保存 6 个月，滴度不会明显下降。建议保存 6~12 个月以上的样品，进行实验前重新测一次滴度。应尽量避免反复冻融（小于 3 次） 。

使用方法

病毒滴度复核（有限稀释法测定）
1) 滴度检测前一天，对 293T 细胞传代，96 孔板每个孔加入约 0.5~10×10 3 个细胞，体积 100ul；
2) 第二天，准备 7~10 个无菌 EP 管，在每个管中加入 90ul 的新鲜完全培养基（高糖 DMEM+10%FBS）；
3) 取待测定的病毒原液 10ul 加入到第一个管中，轻轻混匀后，取 10ul 加入到第二个管中，然后依次操作直到最后一管；
4) 选取所需的细胞孔，吸弃 90ul 培养液，然后将稀释好的病毒液，从低浓度到高浓度依次加入，放入 37℃ 5% CO 2 培养箱中培养；
5) 24 小时后， 每孔换入 100ul 新鲜培养液， 小心操作， 不要吹起细胞； 放入 37℃ 5%CO 2 培养箱中继续培养。
6) 1~3 天后，观察荧光表达情况，正常情况下，荧光细胞数随稀释倍数增加而相应减少，计数最后二个含有荧光细胞的孔中的荧光细胞个数，将得到的数值除以各自相应的稀释倍数，即可计算出病毒原液的滴度值（通常以倒数第二个孔中的读数值更为准确）显微镜品质、相关实验试剂及实验人员操作技能，因此不同实验室测得滴度数值会有所差异（2~10 倍） ，但基本不会影响正常实验流程；
7) 病毒滴度(BT = PFU/ml, transducing units)计算方法：





按 10 4 /孔 293 细胞接种腺病毒后 36～48h, 观察到在 10 -2 、 10 -3 稀释度的样本中 293 细胞出现完全 CPE 现象: 90%细胞变圆, 10%细胞浮起。 按上述公式计算扩增所得腺病毒
的滴度约为 5×10^8 PFU/mll.

产品说明书

相关文献

Guan S, Zhou J. Frizzled− 7 mediates TGF-β-induced pulmonary fibrosis by transmitting non-canonical Wnt signaling. Experimental Cell Research. 2017 Jul 20. in enhanced killing on EGFRvIII-positive cells. Oncotarget. 2017 Apr 18; 8(16): 26256-68.

Xu Z, Han K, Chen J, Wang C, Dong Y, Yu M, Bai R, Huang C, Hou L. VEGF is neuroprotective against ischemic brain injury by inhibiting scavenger receptor A expression on microglia. Journal of Neurochemistry. 2017 Jun.

Yu F, Guo Y, Chen B, Shi L, Dong P, Zhou M, Zheng J. LincRNA-p21 Inhibits the Wnt/β-Catenin Pathway in Activated Hepatic Stellate Cells via Sponging MicroRNA-17-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Jun; 41(5): 1970-80.

Zheng DZ, Bu YM, Wang L, Liu J. MicroRNA-130b Promotes Wear Particle-induced Osteolysis via Downregulating Frizzled-related Protein (FRZB). Current neurovascular research. 2017 Feb; 14(1): 32-8. ry. 2017 Jun; 41(5): 1970-80.

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1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

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