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全基因合成
与传统的从生物体的核酸(基因组DNA或mRNA)钓取方法相比,人工合成全基因有以下优点:
(1)合成周期短,还可以保证序列100%正确无误;
(2)可以对密码子进行优化,以提高基因的表达效率;由于每个物种偏爱的编码子不同,当异源蛋白在 E.coli 里表达时,有些蛋白很难得到高表达。如果将真核生物偏爱的密码子改为原核生物偏爱的密码子,就可以实现真核生物的基因的高效表达;
(3)当只知道某一蛋白或多肽的氨基酸序列而不知其核苷酸序列时,也可以通过人工合成基因的方法进行克隆和表达;
(4)可根据需要进行基因的定点突变以改造基因;
(5)研究人员根据自己的意愿设计得到自然界中很难获得甚至不存在的基因。
吉玛全基因合成服务流程:
1. 当客户提供DNA或者氨基酸序列或者基因ID号时,我们将根据客户的要求对提供的序列进行分析,为客户提供免费基因设计服务,最终序列经客户确认后作为基因合成的基本信息。根据最终序列的具体情况设计合成方案,通过业务员或技术员给客户做出报价。
2. 与客户达成一致意见后,签订基因合成服务协议和保密合同,客户交纳相应预付款。预付款到账即为基因合成开始期限,我们将立即进行单链 Oligo 合成、DNA片段拼接等工作,然后把全长基因克隆于载体中,再通过DNA测序确认合成基因的正确性。
3. 测序结果如果发现有错误位点,我们会采取相应的技术手段进行修复校对,保证整个序列的正确性。
4. 提供实验结果:包括测序彩色峰图、含有目的基因的重组质粒及含该质粒的甘油菌等。
吉玛全基因合成交货期限及收费标准:
基因全长(bp) | 交货期限(工作日) | 价格(¥) |
≤500 | 7-10 | 1000元 |
500-3,000 | 10-30 | 2元/bp |
3,000-6,000 | 30-40 | 3元/bp |
≥6,000 | 每增加1Kb增加5-10个工作日 | 4元/bp |
特殊序列 | 协商 | 协商 |
备注:1)小于300bp的基因,统一按300bp收费;2)以上基因均指构建到克隆载体pUC57中;如需构建表达载体或客户提供载体需额外加收1000元;3)基因结构复杂(如:10bp以上的重复序列;8bp以上的同一碱基的连续结构;GC含量超过70%等)时需视具体情况另行协商收费标准。4)如需空载体对照200元/20ug ;
吉玛全基因合成真核过表达载体类型
目录号 | 产品名称 | 启动子 | 荧光标签 | 真核抗性 | 原核抗性 |
C05001 | pEX-1(pGCMV/MCS/EGFP/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05002 | pEX-2(pGCMV/MCS/IRES/EGFP/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05003 | pEX-3(pGCMV/MCS/Neo) | CMV | -- | Neo | Kan |
C05004 | pEX-4(pGCMV/MCS/T2A/EGFP/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05005 | pEX-5(pGCMV/EGFP/MCS/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05006 | pEX-6(pGCMV/MCS/RFP/Neo) | CMV | RFP | Neo | Kan |
C05007 | pEX-7(pGCMV/RFP/MCS/Neo) | CMV | RFP | Neo | Kan |
吉玛全基因合成真核过表达载体图谱:
1、我公司用于基因合成的标准克隆载体为pUC57,如需克隆到指定的载体中,则该载体应由您提供,我公司将以最优惠的价格帮您完成,每次亚克隆需增加五个工作日,并在结算时按克隆难易程度收取1000元的亚克隆费用。我们提供的甘油菌一般为Top10菌株。
2、若需要提供密码子优化服务,请注明需要优化,并提供给如下讯息:(1) 需要合成的蛋白序列或DNA序列;(2) 宿主表达系统;(3) 两端的限制性酶切位点,优化后的序列中需要避免的限制性酶切位点;(4) 优化后的序列中需要保留的限制性酶切位点。
3、服务协议签订之后,您不得随意更改基因序列;在基因合成的过程中,我公司会在每周五的时候向您报告基因合成的进展情况。
4、为您提供的产品和技术资料包括:(1) 不少于50ug的含目的基因的重组质粒一份;(2) 含上述重组质粒的甘油菌一份;(3) 基因序列100%正确的原始测序报告电子版一份和序列比对文件;(4) 基因合成报告单一份等。
5、我公司承诺:对客户的基因序列不做任何形式的扩散、开发或利用,对相关信息实行完全保密,公司提交产品一个月后,即彻底销毁所有相关的引物、质粒和菌种。
以化学合成DNA oligo为基础,人工合成目的基因的过程。
全基因合成优势
(1)合成周期短,还可以保证序列100%正确无误。(2)可以对密码子进行优化,以提高基因的表达效率。(3)当只知某一蛋白或多肽的氨基酸序列而不知其核苷酸序列时,也可以通过人工合成基因的方法进行克隆和表达。(4)可根据需要进行基因的定点突变以改造基因。(5)研究人员根据自己的意愿设计得到自然界中很难获得甚至不存在的基因。
产品种类
< GPS 1-1 化学合成基因>
< GPS 2-1 基因定点突变>
< GPS 2-2 目的基因的获取及其克隆>
< GPS 2-3 密码子优化和基因设计服务>
< GPS 2-4 质粒提取服务>
出货提供产品及数据资料包括:
1) 高纯度质粒, 大约 10~50ug DNA;
2)含有重组质粒的甘油菌液(500ul);
3)测序原始图谱、序列及载体图谱;
4)全基因合成报告单 ;
5)备注:通常不提供合成的具体方法和实验步骤;如必须提供则200元/份。
GenePharma 基因合成报告单模板
工作编号:xxxx
客户姓名 |
xxx |
基因名称 |
xxx |
基因长度 |
xxxbp |
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克隆载体 |
xxx |
克隆位点 |
xxx/xxx |
宿主菌 |
Top10 |
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交付材料 |
技术资料 |
测序报告正本壹份(电子版) |
√ |
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比对图谱壹份(电子版) |
√ |
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质粒 |
壹份,DNA含量≈50µg (xxx) |
√ |
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菌株 |
含合成基因重组质粒的甘油菌(xxx) 500µl |
√ |
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客户注意事项 |
客户接到本公司合成的合同基因后,如对结果有疑问,请在本报告单签发之日起一个月内与本公司取得联系。一个月后本公司将根据合同销毁封存的各种资料和质粒,不再受理客户的任何申诉。 |
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报告签发 |
签发人 |
xxx |
签发日期 |
xxxx |
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基因签收 |
签收人 |
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签收日期 |
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注意事项
GenePharma所提供的质粒为液体质粒,可以直接用于细胞转染及其他分子生物学实验。如果用户在使用过程中发现质粒的细胞毒性较大,可以通过其他方法制备更高纯度的质粒。
甘油菌液为载体的过夜培养物与甘油的混合物,甘油的终浓度为20%。在4℃可保存2周,在-20℃可保存2个月,在-80℃可长期保存。
运输温度:常温。用户收到试剂盒后,应根据相应的条件保存各组分。
使用方法
1.Lei Xi Meixi Peng Shuiqing Liu et al. Hypoxia-stimulated ATMactivation regulates autophagy-associated exosome release from cancer-associated ibroblasts to promote cancer cell invasion. Journal of Extracellular Vesicles 2021 Sep;10(11):e12146
2.Hongwei Su1, Tao Tao, Zhao Yang et al. Circular RNA cTFRC acts as the sponge of MicroRNA-107 to promote bladder carcinoma progression. Molecular Cancer (2019) 18:27 https://doi.org/10.1186/s12943-019-0951-0.
3. Jing Zhang, Lidan Hou, Rui Liang et al. CircDLST promotes the tumorigenesis and metastasis of gastric cancer by sponging miR-502-5p and activating the NRAS/MEK1/ERK1/2 signaling. Molecular Cancer (2019) 18:80 https://doi.org/10.1186/s12943-019-1015-1.
4. Hang Song, Ji Ma1, Zhixuan Bian et al. Global profiling of O-GlcNAcylated and/or phosphorylated proteins in hepatoblastoma. Signal Transduction and Targeted Therapy 2019 Oct 11;4:40.
5. Wei Xu, Si-Da Han, Can Zhang et al. The FAM171A2 gene is a key regulator of progranulin expression and modifies the risk of multiple neurodegenerative diseases. SCIENCE ADVANCES 2020 Oct 21;6 : eabb3063.
6.Liang Wang1,2, Jing Yang1, He-nan Wang et al. LncRNA BCYRN1-induced autophagy enhances asparaginase resistance in extranodal NK/T-cell lymphoma. Theranostics 2021 Jan 1; 11(2): 925-940.
7. Su-Jie Ni, Li-Qin Zhao, Xiao-Feng Wang et al. CBX7 regulates stem cell-like properties of gastric cancer cells via p16 and AKT-NF-κB-miR-21 pathways. Journal of Hematology & Oncology 2018 Feb 8; 11:17.
8. Jian Chen, Jiali Jin, Xi Zhang et al. Microglial lnc-U90926 facilitates neutrophil infiltration in ischemic stroke via MDH2/CXCL2 axis. Molecular Therapy 2021 Apr 19; 29 No 9.
9.Zhonglin Zhu, Zeyin Rong, Zai Luo et al. Circular RNA circNHSL1 promotes gastric cancer progression through the miR-1306-3p/SIX1/vimentin axis. Molecular Cancer 2019 Aug 22; 18: 126
10.Yang, F., Shen, Y., Zhang, W., Jin, J., Huang, D., Fang, H. (2018). An androgen receptor negatively induced long non-coding RNA ARNILA binding to miR-204 promotes the invasion and metastasis of triple-negative breast cancer. Cell Death & Differentiation, 25(12), 2209-2220.
11.Li, Y., Feng, D., Wang, Z., Zhao, Y., Sun, R., Tian, D. (2019). Ischemia-induced ACSL4 activation contributes to ferroptosis-mediated tissue injury in intestinal ischemia/reperfusion. Cell Death & Differentiation, 26(11), 2284-2299.
12.Marshall J, Zhou X, Chen G, et al. Antidepression action of BDNF requires and is mimicked by Gαi1/3 express in the hippocampus. PNAS. 2018 Feb 14; 115(15): E3549-58.
13.Zhu Z, Yu Z, Rong Z, et al. The novel GINS4 axis promotes gastric cancer growth and progression by activating Rac1 and CDC42. Theranostics. 2019 Oct 21; 9(26): 8294-311.
14.Lou, M. D., Li, J., Cheng, Y., Xiao, N., Ma, G., Li, P.(2019). Glucagon up‐regulates hepatic mitochondrial pyruvate carrier 1 through cAMP‐responsive element‐binding protein; inhibition of hepatic gluconeogenesis by ginsenoside Rb1. British journal of pharmacology, 176(16), 2962-2976.
15.Yuan, Z., Yuan, Z., Hasnat, M., Zhang, H., Liang, P., Sun, L.(2020). A new perspective of triptolide-associated hepatotoxicity: the relevance of NF-κB and NF-κB-mediated cellular FLICE-inhibitory protein. Acta Pharmaceutica Sinica B.
16.Dong F, Jiang S, Li J, et al. The histone demethylase KDM4D promotes hepatic fibrogenesis by modulating Toll-like receptor 4 signaling pathway. EBioMedicine. 2019; 39: 472-83.
17.Lou MD, Li J, Cheng Y, et al. Glucagon up‐regulates hepatic mitochondrial pyruvate carrier 1 through cAMP responsive element‐binding protein; inhibition of hepatic gluconeogenesis by ginsenoside Rb1. British Pharmacological Society. 2019 May 19; 176: 2962-76.
18.Liao, J., Xie, Y., Lin, Q., Yang, X., An, X., Xia, Y(2020). Immunoproteasome subunit β5i regulates diet‐induced atherosclerosis through altering MERTK‐mediated efferocytosis in Apoe knockout mice. The Journal of Pathology, 250(3), 275-287. 1.7.
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目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类:
1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具
产品价格 本产品目录中标示的价格均为国内统一零售参考价,全部为人民币价格。如果大量定购时,在标准价格的基础上有不同程度的优惠。
全基因过表达载体(mRNA, lncRNA):
1. 基因合成费用1.5*基因长度+1000;
2. 序列超过3kb,或特殊序列高GC重复序列等特殊询价周期
3. 我们确保将客户指定序列构建正确(有测序结果证实,对于高GC重复序列可能会有缺失,评估后都会予以说明),如有缺失会免费重复修复一次。保证在工具细胞293T中RNA水平上调2倍。不保证蛋白及其他功能结果。与其他基因融合表达不保证表达基因效果。
4. 如果经过公司293T验证有上调表达显著差异(qPCR),并提供PDF版本验证结果(验证结果产权不属与客户),客户如需验证结果完整服务报告,需要另行支付验证费用3000元,并支付前期货款,收到货款后提交全部原始结果。如果验证无效,可以免费重新构建一次或退票退款或做预付款。如果再次无效则不再免费重新转录,已经付款做预付款处理。
全基因过表达载体(circRNA):
1. 构建费用2*基因长度,低于2000元的按照2000计算;
2. 序列超过3kb,或特殊序列高GC重复序列等特殊询价周期12-25个工作日
3. 我们确保将客户指定序列构建正确(有测序结果证实,对于高GC重复序列可能会有缺失,评估后都会予以说明),对于成环效果,不予保证。如果客户检测无效且已付款,我们可以免费重新更换一次侧翼序列重新构建一次。如果再次无效则不再免费重做。
4. 如需验证费用另计:一条目的circRNA和对照转染工具细胞293T,阳性和对照及空白细胞3个样品验证环化表达效率并测序过表达组环化序列,费用5000~6000元,预付50%启动实验,无效只收预付款)。
质量保证 凡吉玛公司的产品均有严格的质量保证。如果我们发现确实存在质量问题时,保证更换产品。如果在到货后一个月之内用户无提出异议,我们将视本产品为优良产品而不再受理索赔事宜。提出产品异议(或索赔)时,切莫在产品使用完(或快使用完)后提出,以备本公司回收产品,确认产品质量。如果因为您订错制品需要退货时,请务必在三天内退货。同时请您千万不要拆开包装,拆封后的产品不再受理退货事宜。发生索赔事宜时,公司只保证在产品价格额度范围之内酌情赔偿,恕不受理超过制品价格额度以上之部分。
上海公司的联络方式如下:
公司名称:上海吉玛制药技术有限公司
地址:上海市浦东新区哈雷路1011号9幢602室
邮编:201203
电话:021-51320195,021-51370738,021-51370739,4006900195
E-mail:order@genepharma.com(产品订购)support@genepharma.com(技术支持)
上海、南京、浙江、安徽、云南、山东、福建、重庆、四川、贵州、西藏、陕西、甘肃、宁夏、新疆、青海、河南、山西、香港、澳门、台湾以及其他境外客户订货地区请联系上海公司
苏州公司的联络方式如下:
公司名称:苏州吉玛基因股份有限公司
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北京、河北、内蒙古、天津、武汉、江西、黑龙江、吉林、辽宁、湖北、湖南、广东、江苏(除南京)、广西、海南订货地区请联系苏州公司
下单前请务必核对订购表客户信息和订购内容无误,订单一经确认,当天即启动生产。 超过当日17:00后不能修改或者取消,如果需要取消订单,由此产生的费用,将由客户承担。
【取消订单费用规则】
(1)当日17:00前,免费修改或取消。
(2)当日17:00到次日17:00前,按该项产品金额的50%收取。
(3)次日17:00后,按该项产品金额的100%收取。