产品描述

在全基因组范围内，通过siRNA筛选出细胞行为相关的基因已成为药物化学、生命科学研究的常规手段。高通量筛选技术可平行分析成千上万条基因的功能，迅速、全面地鉴定出与细胞功能相关的基因，以及疾病治疗的药物靶基因，保证研究成果更为系统、新颖、准确。

服务内容：

目前提供如下规模文库筛选

1)全基因组siRNA文库 (21585 genes)

2)人类全miRNA文库及inhibitor (983×2)

3)细胞周期调节siRNA文库 (131 genes)

4)去泛素化酶siRNA文库 (127 genes)

5)磷酸化酶文库 (257 genes)

6)细胞因子受体siRNA文库 (319 genes)

7)G蛋白偶联取EKBDsiRNA文库 (516 genes)

8)细胞凋亡siRNA文库 (558 genes)

9)蛋白激酶siRNA文库 (779 genes)

10)订制siRNA文库 (100-2000 genes)

筛选流程

1、提出筛选意向：客户可以登陆我们的网站了解我们的服务内容，可以通过吉诺瑞网站上提供的筛选申请表格，或通过发电子邮件和电话提出筛选意愿。客户在课题保密的基础上，尽可能提供关于课题的背景资料，方便我们的研究人员做前期的调研。(加个网上筛选申请的链接)

2、确定筛选方案：公司资深研究员将根据筛选经验，和客户深入探讨实验思路,包括筛选模型的选择或建立；对筛选文库的确定，然后初步设计一个筛选方案。双方将签订筛选合同及保密协议。筛选项目开始时，客户需要支付一定比例的预付款。

3、优化筛选条件： 根据客户提供或要求的具体细胞种类以及检测方法(如生长、增殖、凋亡、迁移、分化、分泌等等)，确定和优化筛选条件，包括细胞生长条件适应，细胞转染效率的优化，筛选模型的测试和优化等等。

细胞转染效率优化是整个siRNA筛选的关键。只有在比较好的转染效率下，筛选才可行。

筛选模型的定量评估以及优化

为了预先摸索实验条件，需要先进行预实验。其中对预实验结果的估算和判断中，Z因素计算非常重要.

首先要肯定一个实验模型在高通量筛选中的可行性，需要确定该模型在相互独立的实验中(例如每一次实验都单独开展，随机选择起始时间点，或以不同的方法完成)具有可重复并且合适的Z值。

每一个实验模型都应首先在384孔中进行验证。其中一半的孔进行阳性对照实验,另一半的孔进行阴性对照实验。这样产生的实验数据具有统计学意义,可对实验条件进行准确比较。机器的使用或其他相关实验条件，都在这些数据中得到了反映。为将不同的实验条件进行分级,在进行对照组实验后,对所收集得到的数据进行Z因素计算。

SD + = 阳性对照标准差

SD – = 阴性对照标准差

Ave + = 阳性对照平均值

Ave – = 阴性对照平均值

对于小分子筛选实验,Z值大小代表的实验模型合适程度如下:

1 > Z´ > 0.9 非常稳定可靠的实验；

0.9 > Z´ > 0.7 稳定可行的实验；

0.7 > Z´ > 0.5 可以接受的实验条件,但是对于阳性结果的鉴定会显著提高实验效果；

0.5 = Z´ 进行小分子高通量筛选需要达到的最低标准；

这一份表格是在哈佛高通量筛选中心筛选人员提供大量的小分子筛选经验基础上建立起来。我们通常看到筛选的结果很少能达到预实验中对照组那样的高水平。同样,细胞实验通常也不会像在使用纯蛋白实验中那样达到一个Z值那么高的水平。

对于RNAi筛选实验, 我们的筛选经验是:在实验条件最优化时的Z值通常小于0.5.虽然如此,这些RNAi筛选实验仍然可以顺利进行。

4、小规模试筛：确定好细胞的筛选条件后，采用384孔板或SAMcell进行小规模筛选。大约筛选100个基因规模，以确保后续大规模筛选实验的可重复性和条件稳定。

5、大规模siRNA文库筛选： 针对客户所选择的siRNA或miRNA文库进行大规模系统的筛选。

6、提交筛选报告：大规模筛选完成后，进行数据统计，整理分析实验结果, 反馈给客户。通过双方沟通后决定后续操作，如阳性结果的验证。

7、 Cherry pick-up的阳性结果验证：对目的阳性结果，吉诺瑞将与客户沟通，采用Cherry pick-up进行验证，即选一些阳性结果进行验证。

整个筛选周期大约3-6个月，取决于筛选文库大小,筛选方案以及优化时间等因素。

筛选技术

1、常规孔板筛选方法：

常规的siRNA筛选是基于384 或96微孔板，采用一般转染siRNA的方法或者反式转染方法将siRNA导入细胞进行高通量的细胞功能筛选。其中反式转染法由于操作方便，时间较短，常被高通量筛选采用。简单讲，预先将siRNA文库里各条siRNA分别与转染试剂混合，转移到384微孔板中，然后将培养好的细胞接种到微孔板里，细胞被转染siRNA。 经过48-72小时的培养，蛋白表达水平沉默后，通过高通量的微孔板读数仪或高通量的扫描显微镜读出孔板里的细胞信号。若这些细胞信号与参照细胞相比发生了变化，则认为相应的siRNA与研究的细胞过程相关，从而鉴定出相关的候选基因。

微孔板筛选虽然简单明了，使用方便，适合于100-500个基因范围的筛选。但是当筛选库容量增大时，孔板筛选的成本将大大提高。比如，全基因组2万个基因，若重复三次筛选，需做6万次转染、分析，因此使用的siRNA、转染试剂、以及后续检测用的抗体和底物需要量特别大。

2、芯片筛选技术

除了传统的孔板筛选服务外，吉诺瑞针对大规模筛选需求，与北京大学席建忠教授合作，成功开发出先进的自组装芯片芯片技术（SAMcell）。在玻璃盖玻片上，细胞自组装形成细胞岛点阵，极大地提高了筛选通量。同时采用反向转染技术，简化了筛选过程，这将大大减少筛选中使用的siRNA和相应的试剂。

SAMcell技术已经大量应用于siRNA基因文库及化合物库高通量筛选。

SAM cell技术流程：在芯片上点印siRNA或miRNA，接种细胞后，细胞在自组装形成细胞岛点阵，同时siRNA或miRNA自动转染到对应的细胞小岛，最后通过高内涵图像扫描系统成像，分析实验结果。

细胞岛间无交叉污染：在20x20mm的盖玻片上，细胞在自组装形成点阵的同时转染表达GFP的质粒，细胞小岛间隔形成荧光点阵，而相邻的细胞小岛（没有转染GFP质粒）则没有荧光信号。

仪器设备

ImageXpress Micro/Ultra-高内涵图像自动扫描仪

 

PE EnSpire™ 多标记微孔板检测仪

  

  Agilent Bravo Liquid Handing Platform-液体工作站

详细介绍：

（一）ImageXpress Micro/Ultra-高内涵图像自动扫描仪

1、技术特点：

高效的高内涵系统ImageXpress，拥有在24 小时内进行近万个高内涵数据点分析的能力。本设备能够提供自动显微CCD 成像或激光扫描PMT成像的同时提供大量药物筛选和生物学分析的专业应用软件包，能够分析图像中任意变化和改变，并将分析所得数据进行分类和统计分析，充分挖掘各种数据，保证了药物筛选和生物学分析的高速性和准确可靠性。

2、应用领域：

ImageXpress系类HCS产品结合世界知名的图像分析软件MetaMorph 为基础的MetaXpress和细胞信息学AcuityXpress 软件能够解决相关实验中的几乎所有问题。其包含的十八个应用模块涵盖了目前细胞生物学和药物研发的热点研究。这些模块可以应用于肿瘤、免疫疾病、心血管疾 病、神经疾病、肥胖症等的机理研究；涵盖了细胞凋亡、信号通路、神经生长、血管生成、细胞活力、细胞核细胞器转位、细胞表面位移、离子通道、GPCR已 知、未知受体、细胞增殖、细胞毒性分析、分子相互作用……等一系列的基础和药物研究。分析得到的数据可以追踪每一个细胞的原始数据，非常适合QC 的管理。此外，用户还可以根据自己实验的特殊要求，点击鼠标，即可实现编程获得自己所需的应用模块和功能。

（二）Agilent  Bravo Liquid Handing Platform-液体工作站

1、技术特点：

安捷伦Bravo自动化液体处理平台是目前功能最丰富、速度最快、精确度最高的桌面型多功能液体处理系统。Bravo的九台平板设计节省空间，使它可放置 于标准层流净化罩中，进行细胞实验或对有毒试剂做自动化处理。Bravo独特的开放式设计使其不仅可以单独使用，也可在其任一边连接其他仪器以进行灵活整合。

设计紧凑：节省空间的九台板设计，占地小，适合放置于层流净化罩下。

移液精确：应用经过验证的安捷伦Vertical Pipetting Station System高精度移液头，能够 从96孔板，3384孔板，1536孔板中精准移液0.1～200 μL。

功能丰富：拥有7种不同规格、易于更换的移液头和众多的可选配件，能够满足广泛的试验需求。

功能强大、易于整合：特有的开放式设计使其不仅可单机使用，亦可整合多种安捷伦自动化设备或第三方仪器，组成功能强大、运作高效的自动化系统工作站。

易于使用：Brovo由VWorks自动控制软件操控。该软件简单易用，任何操作人员都可以轻松掌握。

2、应用领域：

常规液体处理

梯度稀释

PCR前处理及纯化

细胞实验

过滤试验及其他……

（三）PE EnSpire™ 多标记微孔板检测仪

1、技术特点：

EnSpire平台是一个可灵活配置，提供高性能检测功能和方便易用软件的微孔板检测器。该平台经济实用，可适合在各种规模的实验室中进行研究。用户可根据实验需求，自由组合光吸收、荧光、Alpha和发光检测模块。

1. 业界领先的0.1nm步进的四光栅技术；

2. 荧光-光吸收分析；

3. 支持超灵敏的发光分析；

4. Alpha检测技术；

5. 更宽范围的温度控制和荧光强度底部检测功能；

6. 直观的数据分析界面，使用方便的触摸屏技术，大大降低了实验设置的时间，也简化了实验操作步骤。

2、应用领域：

1. 光吸收检测—进行核酸/蛋白的定量分析，ELISA实验等；

2. 荧光检测—满足所有荧光定量分析的灵敏度要求；

3. 荧光底读检测—进一步提高了活细胞检测的效果；

4. 超敏化学发光检测—是很多细胞增殖、报告基因分析类常用的检测手段，EnSpire提供了超高的灵敏度和线性范围，尤其适合转染率较低的实验。

5. Alpha检测技术（增强的化学发光接近均相技术）——操作简单、方便，结果可靠，是进行各种靶标检测和筛选的理想工具。

可用于蛋白组学、基因组学、药物筛选、环境检测、各种检验检疫领域,可以进行核酸蛋白定量检测、功能基因研究、酶动力学检测、激酶检测、受体结合研究、分子相互作用检测、细胞活力检测等。

服务收费

SAM-cell 细胞芯片高通量筛选siRNA，价格范围从5-100元/genes,试剂费用另算，详细咨询敬请咨询技术热线：0512-87181780.

功能介绍与实验实例

实验数据

使用方法

手册包括siRNA高通量筛选的技术路线和一般步骤，了解更多详情，请拨打我们的技术支持热线400-690-0195详细咨询。


siRNA screen user manual.rar

产品说明书

相关文献

应用实例

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