公司产品

定制siRNA

公司为客户提供不同长度、不同形式,由客户自行设计的RNA oligo。(碱基数小于50 base)

产品描述

目录号 产品名称 规格 纯化方式 价格 交货期限
A09001 客户定制RNA oligo 2 OD HPLC 询价 问询
A09002 客户定制RNA oligo 3 OD HPLC 询价 问询
A09003 客户定制RNA oligo 4 OD HPLC 询价 问询
A09004 客户定制RNA oligo 5 OD HPLC 询价 问询
A09005 客户定制RNA oligo 6 OD HPLC 询价 问询
A09006 客户定制RNA oligo 7 OD HPLC 询价 问询
A09007 客户定制RNA oligo 8 OD HPLC 询价 问询
A09008 客户定制RNA oligo 9 OD HPLC 询价 问询
A09009 客户定制RNA oligo 10 OD HPLC 询价 问询
A09010 客户定制RNA oligo 25 OD HPLC 询价 问询
A09011 客户定制RNA oligo 50 OD HPLC 询价 问询
A09012 客户定制RNA oligo 100 OD HPLC 询价 问询
A09013 客户定制RNA oligo 250 OD HPLC 询价 问询
注:如果需要修饰,请参照修饰的价格表。(碱基数小于30 base)
目录号 产品名称 规格 纯化方式 价格 交货期限
A04001 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 2 OD HPLC ¥650 8个工作日
A04002 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 3 OD HPLC ¥730 8个工作日
A04003 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 4 OD HPLC ¥800 8个工作日
A04004 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 5 OD HPLC ¥900 8个工作日
A04005 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 6 OD HPLC ¥1,000 8个工作日
A04006 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 7 OD HPLC ¥1,200 8个工作日
A04007 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 8 OD HPLC ¥1,300 8个工作日
A04008 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 9 OD HPLC ¥1,500 8个工作日
A04009 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 10 OD HPLC ¥1,600 8个工作日
A04010 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 25 OD HPLC ¥3,200 10个工作日
A04011 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 50 OD HPLC ¥5,800 12个工作日
A04012 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 100 OD HPLC ¥9,000 15个工作日
A04013 5'-生物素修饰siRNA (5' Biotin) 250 OD HPLC 询价 
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A04014 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 2 OD HPLC ¥650 8个工作日
A04015 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 3 OD HPLC ¥730 8个工作日
A04016 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 4 OD HPLC ¥800 8个工作日
A04017 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 5 OD HPLC ¥900 8个工作日
A04018 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 6 OD HPLC ¥1,000 8个工作日
A04019 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 7 OD HPLC ¥1,200 8个工作日
A04020 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 8 OD HPLC ¥1,300 8个工作日
A04021 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 9 OD HPLC ¥1,500 8个工作日
A04022 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 10 OD HPLC ¥1,600 8个工作日
A04023 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 25 OD HPLC ¥3,200 10个工作日
A04024 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 50 OD HPLC ¥5,800 12个工作日
A04025 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 100 OD HPLC ¥9,000 15个工作日
A04026 5'-氨基修饰siRNA (5' Amine) 250 OD HPLC 询价 
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A04027 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 2 OD HPLC ¥650 8个工作日
A04028 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 3 OD HPLC ¥730 8个工作日
A04029 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 4 OD HPLC ¥800 8个工作日
A04030 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 5 OD HPLC ¥900 8个工作日
A04031 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 6 OD HPLC ¥1,000 8个工作日
A04032 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 7 OD HPLC ¥1,200 8个工作日
A04033 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 8 OD HPLC ¥1,300 8个工作日
A04034 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 9 OD HPLC ¥1,500 8个工作日
A04035 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 10 OD HPLC ¥1,600 8个工作日
A04036 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 25 OD HPLC ¥3,200 10个工作日
A04037 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 50 OD HPLC ¥5,800 12个工作日
A04038 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 100 OD HPLC ¥9,000  15个工作日
A04039 5'-磷酸基修饰siRNA (5' Phosphate) 250 OD HPLC 询价 
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A04040 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 2 OD HPLC ¥650 8个工作日
A04041 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 3 OD HPLC ¥730 8个工作日
A04042 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 4 OD HPLC ¥800 8个工作日
A04043 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 5 OD HPLC ¥900 8个工作日
A04044 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 6 OD HPLC ¥1,000 8个工作日
A04045 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 7 OD HPLC ¥1,200 8个工作日
A04046 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 8 OD HPLC ¥1,300 8个工作日
A04047 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 9 OD HPLC ¥1,500 8个工作日
A04048 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 10 OD HPLC ¥1,600 8个工作日
A04049 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 25 OD HPLC ¥3,200 10个工作日
A04050 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 50 OD HPLC ¥5,800 12个工作日
A04051 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 100 OD HPLC ¥9,000 15个工作日
A04052 5'-巯基修饰siRNA (5' Thiol) 250 OD HPLC 询价 
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A04053 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 2 OD HPLC ¥650 8个工作日
A04054 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 3 OD HPLC ¥730 8个工作日
A04055 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 4 OD HPLC ¥800 8个工作日
A04056 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 5 OD HPLC ¥900 8个工作日
A04057 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 6 OD HPLC ¥1,000 8个工作日
A04058 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 7 OD HPLC ¥1,200 8个工作日
A04059 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 8 OD HPLC ¥1,300 8个工作日
A04060 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 9 OD HPLC ¥1,500 8个工作日
A04061 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 10 OD HPLC ¥1,600 8个工作日
A04062 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 25 OD HPLC ¥3,200 10个工作日
A04063 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 50 OD HPLC ¥5,800 12个工作日
A04064 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 100 OD HPLC ¥9,000 15个工作日
A04065 5'-胆固醇修饰siRNA (5' Cholesterol) 250 OD HPLC 询价 
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A04066 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 2 OD HPLC ¥650 8个工作日
A04067 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 3 OD HPLC ¥730 8个工作日
A04068 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 4 OD HPLC ¥800 8个工作日
A04069 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 5 OD HPLC ¥900 8个工作日
A04070 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 6 OD HPLC ¥1,000 8个工作日
A04071 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 7 OD HPLC ¥1,200 8个工作日
A04072 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 8 OD HPLC ¥1,300 8个工作日
A04073 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 9 OD HPLC ¥1,500 8个工作日
A04074 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 10 OD HPLC ¥1,600 8个工作日
A04075 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 25 OD HPLC ¥3,200 10个工作日
A04076 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 50 OD HPLC ¥5,800 12个工作日
A04077 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 100 OD HPLC ¥9,000 15个工作日
A04078 3'-氨基修饰siRNA (3' Amine) 250 OD HPLC 询价 
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A04079 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 2 OD HPLC ¥650 8个工作日
A04080 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 3 OD HPLC ¥730 8个工作日
A04081 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 4 OD HPLC ¥800 8个工作日
A04082 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 5 OD HPLC ¥900 8个工作日
A04083 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 6 OD HPLC ¥1,000 8个工作日
A04084 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 7 OD HPLC ¥1,200 8个工作日
A04085 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 8 OD HPLC ¥1,300 8个工作日
A04086 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 9 OD HPLC ¥1,500 8个工作日
A04087 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 10 OD HPLC ¥1,600 8个工作日
A04088 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 25 OD HPLC ¥3,200 10个工作日
A04089 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 50 OD HPLC ¥5,800 12个工作日
A04090 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 100 OD HPLC ¥9,000 15个工作日
A04091 硫代磷酸骨架修饰siRNA (phosphorothioate linkage) 250 OD HPLC 询价 
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功能介绍与实验实例

胆固醇修饰siRNA细胞转染效率评价                                                 

人肺癌细胞A549,常规培养使用含10% FBS (Hyclone)的DMEM培养基(Gibco)(含4.0 mM L-Glutamine, 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml Streptomycin)中,37ºC 5% CO2培养箱中培养。

细胞转染

实验材料及试剂
DMEM培养基+10% FBS 
无血清无抗生素的DMEM培养基(Gibco) 
Trypsin-EDTA Solution (0.25% Trypsin-EDTA, Gbico) 
转染试剂:Lipofectamine 2000 
12孔板 (Corning) 
siRNA oligo(Genepharma): 
12# 正义链,5'-FAM修饰,反义链5'-胆固醇修饰 
sense: 5'-FAM-GUAUGACAACAGCCUCAAGTT -3'
antisense: 5' -Chol -CUUGAGGCUGUUGUCAUACTT -3'
13# 正义链, 5'-FAM修饰,反义链不修饰 
sense: 5'-FAM-GUAUGACAACAGCCUCAAGTT -3'
antisense: 5' -CUUGAGGCUGUUGUCAUACTT -3'

步骤

1、接种细胞:对于贴壁细胞,转染前一天,将细胞消化后铺到12孔板中,接种细胞数约为5×104/孔,使转染时细胞长至30-50%融合。

2、在50µl 无血清培养基中加入20pmol的siRNA,轻轻混匀;

3、在另一份50µl 无血清培养基中加入如下表所示 Lipofectamine2000的量,混匀,室温孵育5min;

组别 1 2 3
siRNA(pmol) 20 20 20
Lipo2000(μl) - 0.5 1

1、合并上述稀释的siRNA和Lipo2000, 轻柔混合,室温静置20min;

2、静置时,给12孔板换液,每孔加入500μl预热的无血清培养基;

3、将100 µl 转染混合物加入孔中。加完后将板轻晃摇匀;

4、37℃静置培养细胞,6hr后给细胞换液成新鲜的含10%FBS的DMEM培养基,并在荧光显微镜下观察拍照。

实 验 结 果 与 分 析 





图1 胆固醇修饰与否的siRNA在不同浓度转染试剂下的转染效率(200×)
 
结果显示,特殊定制的胆固醇修饰siRNA 能够有效促进siRNA的细胞转染效率,显著减少转染试剂用量。

使用方法

siRNA转染的方法

哺乳动物转染的常见方法有:磷酸钙共沉淀、电穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、机械法(例如,显微注射和基因枪)、阳离子脂质体试剂,其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

应用脂质体型转染试剂进行转染需要注重的几个方面:转染试剂的用量、siRNA的用量、转染时的细胞密度、转染时的操作顺序、细胞与转染试剂/siRNA复合物的温浴的时间


A. GP-transfect-Mate 操作流程(24 孔板)

24 孔板为例,若要检测基因沉默或者过表达效果,推荐最低RNA oligo终浓度为50nM

DNA0.5~1.5μg);遵循以下操作方法可以高效地将RNA  oligo或者DNA转染贴壁和悬浮培养的多种真核细胞。但是对某些特殊的细胞系和培养条件,或特殊应用等,也需要单独特别优化,请参考表 1、表2

1. 细胞铺板

转染时细胞密度:一般来说,当细胞密度达到60%80%时进行转染可以取得较高的转染效率(参见表1)。然而,不同细胞的最适转染密度都不尽相同,因此在初次转染某种细胞时,可以通过预实验先确认该细胞最佳的转染密度。

2. 转染复合物的制备

1)将 GP-transfect-Mate转染试剂放置于室温中,使用前轻轻混匀。

2)在1.5 ml无菌离心管中加入50 μl无血清培养基或 OPTI-MEM,并添加适量的转染试剂(参见表2),用移液器轻轻混匀,室温静置5 min

3)同时在另一1.5 ml无菌离心管中加入50 μl无血清培养基或 OPTI-MEM,并添加适量的RNA oligo/DNA (参见表2),用移液器轻轻混匀,室温静置5 min

4)将GP-transfect-Mate-培养基混合物滴加至RNA oligo/DNA-培养基混合物中,用移液器轻轻混匀,室温静置15-20 min 后,立即转染。

注:复合物尽量在60 min内使用,并且GP-transfect-Mate-培养基混合物和RNA oligo/DNA-培养基混合物的混合次序非常重要,切勿颠倒。

3. 转染过程

1)趁静置时,给 24 孔板换液,每孔换上 0.4ml 预热的新鲜培养基。

2)将 100 µl 转染混合物加入孔中,终体系为500 µl。加完后将板轻轻晃动以使复合物均匀分布。

337℃静置培养细胞,4-6h换成完全培养基。24-72 h检测mRNA表达,48-96 h检测蛋白表达。

适用范围

293T, A549, Beas-2B,HeLa,ECA-109,Raw264.7,A375,CAFs,HCT116,HT29,LMH,NE-4C,MGC803,PC-3, PC-12MCF-7,C6等细胞。

 1: 贴壁细胞或悬浮细胞接种数量、培养基体积

培养器皿

每孔表面积(cm2

每孔培养基的体积(ml

贴壁细胞转染前一天接种密度

悬浮细胞转染当天接种密度

96 孔板

0.3

0.1

5 000±2 500

2-5×104

24 孔板

2

0.5

25000±10 000

1-2.5×105

12 孔板

4

1

50000±20 000

2-5×105

孔板

10

2

150000±50 000

0.4-1×106

60mm

20

4

400000±100 000

1-2.5×106

100mm

60

10

1*106±250 000

2-5×106

注:贴壁细胞培养密度取决于培养器皿的表面积,而悬浮细胞则由培养基的体积决定。

 2 不同培养板转染DNA/RNA  oligo的推荐转染条件

培养器皿

Growth

Medium

Opti-MEM/ Serum-free Mediumfor complex

DNA 转染

RNA转染

DNA/μg

转染试剂/μl

RNA/pmol

转染试剂/μl

96 孔板

100 μl

2×10μl

0.2

0.4-1

20

0.5-1

24 孔板

500 μl

2×50μl

0.6

1.2-3

40

1-3

12 孔板

1ml

2×100μl

1.5

3-6

80

3-5

孔板

2 ml

2×200 μl

3

6-12.5

150

5-8

60mm

5ml

2×500 μl

6-10

12-20

300

10-20

100mm

10 ml

2×1ml

15-30

30-60

500

25-35

注:GP-transfect-Mate转染试剂的用量在此范围内进行优化。

 


B.Lipofectamin2000 转染试剂

选择最适合的转染试剂和转染条件,往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000适用于核酸的体内和体外操作,可应用于DNA、RNA、反义寡核苷酸、siRNA的转染,也可应

用于DNA/siRNA的共转染操作;是一种新型的高效siRNA转染试剂。


Lipofectamin2000的应用领域:

1、原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
2、siRNA高通量转染试验
3、DNA转染;DNA和siRNA的共转染
4、核酸(siRNA、DNA、RNA)的体内导入试验
5、贴壁细胞和悬浮细胞转染


Lipofectamin2000 的特点: 

1、不必更换培养基,操作简便易行,可在半小时内完成操作
2、在含血清培养基中也能表现高转染效率
3、细胞毒性低;适用细胞广泛
4、即用型试剂,可在含有抗生素的完全培养基中转染
5、基于脂质的转染试剂,确保没有RNAse活性
6、可介导siRNA高转染细胞及体内siRNA的高效导入


C. Lipofectamin2000适用的细胞类型

Lipofectamin2000转染试剂可广泛应用于多种细胞系的DNA和siRNA转染如:HeLa(人颈部癌细胞)、MCF-7(人乳房癌细胞)、Hep3B(人肝细胞癌细胞)、COS-7(猴肾细胞)、Neuro-2a(鼠神经母细胞瘤细胞)、NIKS(人角质化细胞)、B16(鼠黑素瘤细胞)、DLD-1(人结肠癌细胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纤维细胞)、HT-29(人结肠腺癌细胞)、A549(人肺癌细胞)、CHO-k1(仓鼠卵巢细胞)和293(腺病毒5 DNA转化的人胚胎肾细胞),SVRbag4细胞等。


D.转染前细胞培养

在细胞板上培养细胞时,应使细胞汇合在24小时内达到70-90%。


E.合适的lipofectamin2000用量

合适的siRNA(DNA):lipofetamin2000比例对核酸的高效转染有重要影响;我们推荐的DNA:lipofetamin2000为1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000为1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情况下,此范围内都可获得高的转染效率。



F.贴壁细胞转染程序

选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。

1、转染前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上, 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM(或Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
4、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μllipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;

5、将稀释好的siRNA和RNAi-Mate试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
6、将100μl siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中,来回轻柔摇晃细胞培养板板。
7、 细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  


G.悬浮细胞转染程序

1、转染的当天,收集细胞离心,用含FBS的培养基重悬。
2、在50μl的DMEM(或Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清的培养基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA),柔和混匀;
3、混匀lipofectamin试剂,用50μl无血清的DMEM或Opti-MEM,或其他无血清培养基)稀释1μl lipofectamin试剂(DNA转染时,则加入2μl lipofectamin试剂),轻轻混匀,室温放置5分钟;
4、将稀释好的siRNA和lipofectamin试剂混合;轻柔混匀,室温放置20分钟,以便形成siRNA/lipofectamin(或DNA/lipofectamin)复合物。
5、再加入400μL细胞悬浮液(细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间)。
6、细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。  



H.DNA和siRNA共转染细胞

1、在转染的前一天,4-5´104细胞接种在24孔板上,0.5 mL含FBS和抗生素的细胞培养基。
2、选择用于初期接种的细胞密度,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。
3、在100μL的无血清的培养基中稀释20pmol siRNA和0.2μg DNA,加入2μl lipofectamin试剂,充分混合,放置20分钟,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin复合物。
4、将siRNA/ DNA/lipofectamin复合物加入培养基中,轻轻混匀。
5、细胞在37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它步骤。


I.siRNA体内导入方法

1、适量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的无菌水中,轻轻混匀,因为注射液体积有限,建议采用高浓度的siRNA或DNA,一般DNA为2μg /μL、siRNA为10μg /μL。
2、取适量的DNA、siRNA或siRNA\DNA复合物与lipofectamin混合。例如,在1#管中加入0.5μL的DNA(1μg)和0.5μL的siRNA(5μg),在2#管中加入0.55μL的lipofectamin(24μg)和0.45μL不含RNA酶的无菌水中,将1#管中的溶液加入2#管中,在室温下温育30分钟,以形成siRNA/DNA-lipofectamin复合物。
3、制备的siRNA/DNA-lipofectamine复合物可用于体内导入siRNA、DNA或siRNA\DNA。

产品说明书

相关文献

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