公司产品

shRNA慢病毒载体

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,

产品描述

慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。


载体的技术特点

1、大大提高对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等转导效率
2、快速获得高水平的表达
3、目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加
4、将免疫反应降到最低
5、能够插入大的片段(~7.5 kb)
6、能够应用于干细胞研究
7、最低的细胞毒性


慢病毒表达系统

本公司使用的慢病毒表达系统,它由三部分组成:慢病毒表达载体、慢病毒包装质粒、可产生假病毒颗粒的细胞系


慢病毒表达载体包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装,包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染,目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,从而高水平的表达效应分子。


慢病毒介导的 siRNA活体实验用病毒液服务流程

对于活体 RNAi实验模型,吉玛公司可以为您生产高质量的病毒液,服务流程如下:

根据目的基因相关信息(序列,序列号等),利用高效的设计软件,设计 siRNA序列,针对每条目的基因,我们设计4条siRNA序列,其中1条序列为阴性对照组;

根据设计好的 siRNA序列,设计,合成两条互补的短片段的DNA;

对合成好的 DNA片段进行稀释,退火,连接到线形化处理过的载体,转化,涂平板,过夜培养;

通过 PCR的方法筛选阳性菌落,进行测序,分析测序结果;

对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的 siRNA病毒穿梭质粒;

利用构建好的质粒做转染实验, 48小时后通过实时荧光定量和Western的方法分析目的基因,筛选出一条最有效的siRNA序列;

筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;

浓缩、纯化病毒液,测定滴度;

提供高质量的病毒液给客户(对于活体实验,我们建议的病毒基本单位为 1×10^9TU/ml ,对于小鼠尾静脉给药建议50~100ul/只)


Lentiviral shRNA的基因沉默效率



Lentiviral shRNA 抑制生长导管形成



Lentiviral shRNA 引起的表型变化



即用型Lentivirus shRNA构建包装服务

Lentivirus shRNA服务特点:

1、适用于原代培养细胞,难以转染的各种细胞

2、可用于制备多种稳定沉默特定基因的细胞株

3、您通过GenePharma SupersilencingTM Vector方法筛选到有效的的基因沉默靶点,如果您需要构建慢病毒载体来满足实验需求



Lentivirus shRNA载体

GenePharma Supersilencing Vector 干扰载体 
包装载体:Helper vector-I
Helper vector-II
Helper vector-III
提高包装效率和对特定细胞的感染力,提高生物安全性



品质保证

客户自己提供的序列委托我们制备的病毒颗粒,我们确保制备的病毒颗粒携带片段的正确性,确保病毒颗粒的总数和病毒颗粒的滴度达到合同规定的要求。

siRNA高效表达慢病毒载体构建

1. 通过专业设计人员的精心筛选获得欲筛选的siRNA序列。

2. 设计siRNA 正义、反义链,选择相应loop结构,加上酶切位点的目的序列。

3. 合成相应的DNA序列,然后克隆于相应的慢病毒表达载体。

4. 将载体转化到宿主菌中进行克隆、筛选,得到质粒重组体即siRNA表达载体。

5. siRNA表达载体在真核细胞中可产生siRNA,从而在细胞内产生特定基因的沉默效果。此方法是多种siRNA制备方法中唯一可以进行长期基因沉默研究的方法。

本公司为您提供siRNA高效表达慢病毒载体构建服务。构建好的siRNA表达载体,可直接用于转染细胞进行RNA干扰操作。


服务要求 

1. 通过E-mail发送订单,告知选定的相应的基因信息,待构建的靶点信息。靶基因在NCBI数据库中的Gene ID、Accession No.

2. 我们可为您免费设计siRNA序列.

订购流程

1. 请用E-mail或者电话联系吉玛公司。E-mail:order@genepharma.com;Tel:021-51320195。

2. 根据客户提供的基因信息设计siRNA序列,并由客户确认。 

3. 根据客户提供的siRNA序列信息或经客户确认的siRNA序列信息设计引物。 

4. 根据所选择的慢病毒载体构建相应的siRNA表达载体。 

5. 在完成相应的试验后,我们将为您提供一套完整的实验结果,其中包括:实验操作说明、电子版的测序结果及彩图、构建好的siRNA慢病毒表达载体质粒及其甘油菌等。 

目录号 产品名称 规格 价格 交货期限
C06001 慢病毒干扰载体LV-1 (pGLVU6/GFP) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06002 慢病毒干扰载体LV-2N (pGLVU6/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06003 慢病毒干扰载体LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06004 慢病毒干扰载体LV-9N (pGLVU6/mCherry) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06005 慢病毒干扰载体LV-10N (pGLVU6/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06006 慢病毒干扰载体LV-12 (pGLVH6/luci05/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06007 慢病毒干扰载体LV-15N (pGLVH1/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06008 慢病毒干扰载体LV-16 (pGLVU6/Firefly/Puro) 50μg ¥1,000 15个工作日
C06027 慢病毒干扰载体 LV-U6-Neo  50μg ¥1,000 15个工作日
C06028 慢病毒干扰载体 LV-U6-copGFP-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15个工作日
C06029 慢病毒干扰载体 LV-U6-mCherry-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15个工作日
C06030 慢病毒干扰载体 LV-U6-Luci17-T2A-Neo    50μg ¥1,000 15个工作日



吉玛基因shRNA慢病毒载体图谱


                   

  •          
  •           

  •            

  •            

  •              





功能介绍与实验实例

慢病毒载体是一类重组逆转录病毒载体,由於其结构和功能的特点作为一种重要的基因转移工具被应用於 基因治疗和细胞分子生物学研究领域,区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能 力。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染 神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治 疗效果。慢病毒载体的研究发展得很快,研究的也非常深入。在美国已经开展了临床研究,效果非常理想,因 此具有广阔的应用前景。

 1、 大大提高对於一些较难转染的细胞, 如原代细 胞、干细胞、不分裂的细胞等转导效率 


2、 目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加 


3、能够插入大的片段(~ 7.5 kb) 


4、最低的细胞毒性 


慢病毒滴度检测照片

200×荧光显微镜下观察荧光进行滴度检测96孔细胞板 10ul阴性对照病毒原液稀释10-5后,
1ml病毒原液滴度100(一个视野100个荧光细胞)×4(平均4个视野)×105(稀释倍数)×100=4×10^9 TU/ml








使用方法

慢病毒介导的 siRNA活体实验用病毒液服务流程

对於活体 RNAi实验模型,吉玛可以为您生产高质量的病毒液,服务流程如下:

1、根据目的基因相关信息(序列,序列号等),利用高效的设计软件,设计 shRNA序列,针对每条目的
基因,我们设计4条shRNA序列;

2、根据设计好的 shRNA序列,设计,合成两条互补的短片段的DNA;

3、对合成好的 DNA片段进行稀释,退火,连接到线形化处理过的载体,转化,涂平板,过夜培养;

4、通过 PCR的方法筛选阳性菌落,进行测序,分析测序结果;

5、对於测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的 shRNA病毒穿梭质粒;

6、筛选出的高效重组载体和病毒包装质粒共转染 293T细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;

7、浓缩、纯化病毒液,测定滴度;

8、提供高质量的病毒液给客户(对於活体实验,我们提供的病毒基本单位为 1×10^8TU/ml ,这个单位为一只小鼠一次实验的平均用量)

产品说明书

相关文献

1.Qu H, Lin K, Wang H, Wei H, Ji B, Yang Z, Peng C, Xiao X, Deng H. 1, 25 (OH) 2D3 improves cardiac dysfunction, hypertrophy, and fibrosis through PARP1/SIRT1/mTOR‐related mechanisms in type 1 diabetes. Molecular nutrition & food research. 2017 May; 61(5).

2.Sun W, Cai H, Zhang G, Zhang H, Bao H, Wang L, Ye J, Qian G, Ge C. Dmrt1 is required for primary male sexual differentiation in Chinese soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis. Scientific Reports. 2017 Jun; 7: 4433. 

3.Tan X, Lv J, Zhao G, Zhao Z, Li C, Xu Y, Hu M. MicroRNA‐4656 is a prognostic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

4.Wang H, Shen Q, Zhang X, Yang C, Cui S, Sun Y, Wang L, Fan X, Xu S. The long non-coding RNA XIST controls non-small cell lung cancer proliferation and invasion by modulating miR-186-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Apr; 41(6): 2221-9. an>4656 is a prognostic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

5.Yan X, Zhu Z, Xu S, Yang LN, Liao XH, Zheng M, Yang D, Wang J, Chen D, Wang L, Liu X, Liu J, Chen RH, Zhou XZ, Lu KP, Liu H. MicroRNA-140-5p inhibits hepatocellular carcinoma by directly targeting the unique isomerase Pin1 to block multiple cancer-driving pathways. Scientific Reports. 2017; 7: 45915. stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

6.Yu F, Guo Y, Chen B, Shi L, Dong P, Zhou M, Zheng J. LincRNA-p21 Inhibits the Wnt/β-Catenin Pathway in Activated Hepatic Stellate Cells via Sponging MicroRNA-17-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Jun; 41(5): 1970-80. mso-bidi-language:AR-SA'> stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

7.Xu Z, Han K, Chen J, Wang C, Dong Y, Yu M, Bai R, Huang C, Hou L. VEGF is neuroprotective against ischemic brain injury by inhibiting scavenger receptor A expression on microglia. Journal of Neurochemistry. 2017 Jun. 0-80. mso-bidi-language:AR-SA'> stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

8.Xu W, Zhang Z, Zou K, Cheng Y, Yang M, Chen H, Wang H, Zhao J, Chen P, He L, Chen X, Geng L, Gong S. MiR-1 suppresses tumor cell proliferation in colorectal cancer by inhibition of Smad3-mediated tumor glycolysis. Cell Death & Disease. 2017 May; 8(5): e2761. 

9.Cai H, Yao J, An Y, Chen X, Chen W, Wu D, Luo B, Yang Y, Jiang Y, Sun D, He X. LncRNA HOTAIR acts as competing endogenous RNA to control the expression of Notch3 via sponging miR-613 in pancreatic cancer. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 32905-17. 

10.Chen MB, Ji XZ, Liu YY, Zeng P, Xu XY, Ma R, Guo ZD, Lu JW, Feng JF. Ulk1 over-expression in human gastric cancer is correlated with patients' T classification and cancer relapse. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 33704-12.

11.Li J, Wang P, Xie Z, Yang R, Li Y, Wu X, Su H, Deng W, Wang S, Liu Z, Cen S, Ouyang Y, Wu Y, Shen H. Elevated TRAF4 expression impaired LPS-induced autophagy in mesenchymal stem cells from ankylosing spondylitis patients. Experimental & Molecular Medicine. 2017 Jun; 49(6): e343.

12.Liu N, Zhang L, Wang Z, Cheng Y, Zhang P, Wang X, Wen W, Yang H, Liu H, Jin W, Zhang Y, Tu Y. MicroRNA-101 inhibits proliferation, migration and invasion of human glioblastoma by targeting SOX9. Oncotarget. 2017 Mar 21; 8(12): 19244-54.

13.Liu W, Mao L, Ji F, Chen F, Hao Y, Liu G. Targeted activation of AMPK by GSK621 ameliorates H2O2-induced damages in osteoblasts. Oncotarget. 2017 Feb 2; 8(6): 10543-52.

14.Zhang C, Zhang W, Lu Y, et al. NudC regulates actin dynamics and ciliogenesis by stabilizing cofilin 1. Cell research. 2016 Feb; 26: 239-53.



订购须知

目录分类 本商品目录中的产品介绍按以下内容分类:

1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

产品价格 本产品目录中标示的价格均为国内统一零售参考价,全部为人民币价格。如果大量定购时,在标准价格的基础上有不同程度的优惠。 

质量保证 凡吉玛公司的产品均有严格的质量保证。如果我们发现确实存在质量问题时,保证更换产品。如果在到货后一个月之内用户无提出异议,我们将视本产品为优良产品而不再受理投诉事宜。提出产品异议(或投诉)时,切莫在产品使用完(或快使用完)后提出,以备本公司回收产品,确认产品质量。由于订错产品而产生的退货情况,原则上由客户承担相关费用。发生投诉事宜时,公司只保证在产品价格额度范围之内酌情赔偿,恕不受理超过制品价格额度以上之部分。退款时需退还原始发票。




下单前请务必核对订购表客户信息和订购内容无误,订单一经确认,当天即启动生产。 超过当日17:00后不能修改或者取消,如果需要取消订单,由此产生的费用,将由客户承担。

【取消订单费用规则】

(1)当日17:00前,免费修改或取消。

(2)当日17:00到次日17:00前,按该项产品金额的50%收取。

(3)次日17:00后,按该项产品金额的100%收取。


点击查看更多经销商信息>>