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miRNA模拟体

吉玛为客户提供不同长度、不同形式的microRNA mimics,microRNA序列来自sanger miRNA数据库(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)

产品描述

GMR-miRTM  microRNA mimics

吉玛为客户提供不同长度、不同形式的microRNA mimics,microRNA序列来自sanger miRNA数据库(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)
GMR-miRTM microRNA mimics的应用,利用GMR-miRTM microRNA mimics模拟活体microRNA活性来研究gain-of-function效应,筛选调控基因表达和影响细胞发育过程的miRNAs,深入研究miRNA在一些生物过程中的作用,如细胞的发育、增殖、分化和凋亡,发现和验证内源性的miRNA target。


目录号
产品名称
规格(OD)
纯化方式
价格
B01001
GMR-miRTM microRNA
single-stranded mimics
2
HPLC
¥350
B02003
GMR-miRTM microRNA
double-stranded mimics
4
HPLC
¥500


备注:

1. 保证序列正确、质量和纯度达标,达到共同保证要求,转染效率80%保证一种qPCR方法能检测到miRNA上调显著性差异(与对照比较),只接受一次无效投诉,需款到后发送重合产品,如果重新合成后再次无效,则不再接受投诉处理。由于靶基因调控因素较多,不保证其调控相关基因变化。

2. 针对circRNA过表达,鉴于不同细胞,不同circ序列等因素都会影响环化效果,我们确保将客户指定序列构建正确(有测序结果证实,对于高GC重复序列可能会有缺失,评估后都会予以说明),对于成环效果,不予保证。如果客户检测无效且已付款,我们可以免费重新更换一次侧翼序列重新构建一次。如果再次无效则不再免费重做。目前我们成功率大约在70%左右(指环化转染过表达测序验证完全正确,如需验证费用另计:一条目的circRNA和对照转染工具细胞293T,阳性和对照及空白细胞3个样品验证环化表达效率并测序过表达组环化序列,费用5000~6000元,预付50%启动实验,无效只收预付款)。

功能介绍与实验实例

产品: GMR-miRTM microRNA mimics
目录号: B01001
规格: 2 OD
纯化方式: HPLC纯化 
产品形式: 干粉 
储存条件: 在-20℃或者-80℃条件下长期存放

质量控制 

PAGE检测: 产品是准确分子量大小且经过特殊化学分子修饰的双链mimics分子。 
HPLC纯化: 经过HPLC纯化并测定miRNA mimics,纯度》95% 
注意事项 : RNA oligo在操作过程中,如果有外源的核酸酶存在,RNA oligo容易发生降解。在进行相关实验中,请带手套进行操作,尽量避免RNAase污染,试管,移液枪和枪头都要避免污染。收到产品后尽快储存在-20℃或-80℃环境中。 

MicroRNA mimics 的重悬:

1、在最大转速为4,000g的低速条件下离心EP管,让miRNA mimics 聚集在试管的底部。

2、轻轻的打开管盖。

3、1OD加入DEPC水125ul,配成20uM的储存液。

4、柔和地用移液枪吹打储备液5-6次。

5、根据具体用量情况分装,避免多次冻融。

6、在重新储存的时候注意密封好EP管。

7、贮存在-80℃,以备使用。

使用方法

miRNA mimics 是根据microRNA 成熟体序列设计的双链小RNA分子,用于模拟内源性成熟体miRNA序列。mimics包括一条与目标miRNA成熟体序列一致的序列,以及一条与miRNA成熟体序列互补的序列。特异的miRNA mimics 能够被导入到表达对应的miRNA细胞中,模拟microRNA的作用,或者与构建有miRNA结合位点的双荧光素报告系统结合,验证miRNA与靶基因之间的调控关系。


mRNA表达水平分析 

为了分析miRNA的上调水平,miRNA mimics 可以被转染进入细胞并通过 Northern blotting 检测,以及实时定量荧光PCR检测的方法进行检测。

靶基因表达水平分析 

通过对转染miRNA mimics 和阴性对照序列的细胞内mRNA靶基因进行实时定量荧光PCR检测和western Blotting 检测,可以检测靶基因蛋白的表达水平,验证miRNA与靶基因之间的调控关系。


miRNA3’UTR靶位点验证分析


通过将一个或多个预测的miRNA3‘UTR结合靶位点构建到报告质粒上,并将miRNA mimics 和报告质粒共转染细胞,mimics可以抑制报告质粒上的报告基因,从而可以直接检验mimics和miRNA预测结合位点之间的作用关系。我们建议使用miRNA mimics 阴性对照作为参照,阴性对照的实验浓度,转染条件与实验组相同。
转染程序 

转染效率对不同的细胞株和不同的转染试剂是不同的。
最优的转染条件还是需要通过实验来确定。我们建议优化时的miRNA mimics的浓度范围可以放宽至1-100nM之间。


培养皿类型

96 wells

24 wells

12 wells

6 wells

转染试剂

0.3–1.0 μL

1–3 μL

2–4 μL

3–6 μL

miRNA Mimicsb

3 pmol

15 pmol

30 pmol

75 pmol

细胞密度c

6,000 cells/well

40,000 cells/well

80,000 cells/well

200,000 cells/well

每孔培养基体积

0.1 mL

0.5 mL

1.0 mL

2.5 mL



A:转染试剂的推荐量,根据您订购的试剂不同应做适当的调整。
B: 所显示的添加量是miRNA mimics 终浓度为30nM的量。由于最大miRNA mimics 活性的量在不同细胞类型是有差异的,所以推荐您自行优化。
C.对细胞密度只是推荐值,不同的细胞株有一定的变化,主要看细胞的大小和生长情况,一般我们推荐的细胞融合度在30-70%为佳。

转染优化:

 优化转染效率是使得miRNA mimics活性最大化的关键因素之一,对每种转染试剂而言,首先要确定一款合适的转染试剂,主要看从以下几点

1、转染试剂的量 
2、miRNA agomir的量 
3、转染时的细胞密度 
4、转染时的操作顺序 
5、细胞与转染试剂/siRNA复合物的接触时间

产品说明书

相关文献

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2.Kong LY, Xue M, Zhang QC, Su CF. In vivo and in vitro effects of microRNA-27a on proliferation, migration and invasion of breast cancer cells through targeting of SFRP1 gene via Wnt/β-catenin signaling pathway. Oncotarget. 2017 Feb; 8(9): 15507-19.

3.Kong X, Liu F, Gao J. MiR-155 promotes epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma cells through the activation of PI3K/SGK3/β-catenin signaling pathways. Oncotarget. 2016 Oct 4; 7(40): 66051-60. 

4.Li X, Liang Q, Zhang W, Li Y, Ye J, Zhao F, Chen X, Wang S. Bio-inspired bioactive glasses for efficient microRNA and drug delivery. Journal of Materials Chemistry B. 2017 Jul.

5.Ren Y, Chen Y, Liang X, Lu Y, Pan W, Yang M. MiRNA-638 promotes autophagy and malignant phenotypes of cancer cells via directly suppressing DACT3. Cancer Letters. 2017 Apr 1; 390: 126-36. 

6.Sun Y, Xu J, Xu L, Zhang J, Chan K, Pan X, Li G. MiR-503 Promotes Bone Formation in Distraction Osteogenesis through Suppressing Smurf1 Expression. Scientific Reports. 2017 Mar; 7: 409.

7.Xue X, Qiu Y, Yang HL. Immunoregulatory Role of MicroRNA-21 in Macrophages in Response to Bacillus Calmette-Guerin Infection Involves Modulation of the TLR4/MyD88 Signaling Pathway. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 May 12; 42(1): 91-102.

8.Yu F, Guo Y, Chen B, Shi L, Dong P, Zhou M, Zheng J. LincRNA-p21 Inhibits the Wnt/β-Catenin Pathway in Activated Hepatic Stellate Cells via Sponging MicroRNA-17-5p. Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Jun; 41(5): 1970-80.

9.Zhou Z, Wan J, Hou X, Geng J, Li X, Bai X. MicroRNA-27a promotes podocyte injury via PPARγ-mediated β-catenin activation in diabetic nephropathy. Cell death & disease. 2017 Mar; 8(3): e2658.

10.Zeng Z, Wang K, Li Y, Xia N, Nie S, Lv B, Zhang M, Tu X, Li Q, Tang T, Cheng X. Down-regulation of microRNA-451a facilitates the activation and proliferation of CD4+ T cells by targeting Myc in patients with dilated cardiomyopathy. Journal of Biological Chemistry. 2017 Apr 7; 292(14): 6004-13.


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1. RNA干扰研究工具
2. MicroRNA研究工具 

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