公司产品

RNAi项目服务

吉玛目前的细胞生物学检测项目主要有:细胞增殖(CCK-8 )、细胞周期& 凋亡(FACS),侵袭迁移、划痕、粘附、克隆形成等项目。

产品描述

RNAi技术不仅可作为研究功能基因的强大武器,并且可以抑制致病基因的表达并作为一种潜在的治疗方式用于疾病的治疗。RNAi实验的成功关键在于以下几点:

1、靶序列的选择和siRNA的设计
2、细胞系和细胞培养体系
3、转染条件
4、靶基因的mRNA的积累和替代比率
5、目的蛋白的半衰期
6、mRNA、蛋白质和表型水平上的精确分析



GenePharma公司RNAi服务团队的专业的技术服务能够帮助客户最大化实现RNAi技术应有的价值和避免一些实验错误。我们的研究队伍将和您一起开发更加广泛有效的的解决方案。

RNAi服务包括两个方面:

1、化学合成RNAi服务

2、载体介导的RNAi服务

3、慢病毒介导的RNAi服务


GenePharma RNAi 服务应用领域:

功能基因组学、基因治疗、药物靶筛选、细胞信号传导通路分析、蛋白质相互作用等。


 


1.化学合成siRNA项目服务

1、RNAi 双链设计:客户需要与我们共同讨论实验方案,并提供靶基因名称、序列或GeneBank ID等。

2、siRNA合成

3、根据客户要求可进一步转染哺乳动物细胞;

4、检测抑制效果:荧光定量PCR检测mRNA表达情况、Western Blot检测蛋白表达情况。

5、提供实验报告:siRNA序列;荧光定量PCR检测报告、Western Blot图片等。

2.载体介导的RNAi项目服务

1、shRNA设计:客户需要与我们共同讨论实验方案,并提供靶基因名称、序列或GeneBank ID ID等。

2、 shRNA合成

3、 shRNA载体的选择,GenePharma公司提供pGPU6/GFP/Neo、pGPH1/GFP/Neo等多种载体

4、根据客户要求可进一步转染哺乳动物细胞;

5、检测抑制效果:荧光定量PCR检测mRNA表达情况、Western Blot检测蛋白表达情况。

6、提供实验报告:shRNA序列、构建载体的测序报告;荧光定量PCR检测报告、Western Blot图片等。

服务费用:

根据具体实验要求而定

参考价格如下:

目录号 服务项 价格 交货期
K-01 siRNA/shRNA转染、定量PCR检测和Western Blot ¥11980 25-30个工作日
K-02 siRNA/shRNA转染、定量PCR检测 ¥9800 25-30工作日
K-03 SiRNA/shRNA转染、Western Blot ¥9800 25-30工作日

3.慢病毒介导的RNAi项目服务

1、 根据客户需要进行慢病毒构建

2、根据客户需要进行病毒颗粒的包装

3、 根据客户需要进行RNAi效果的检测

服务费用具体价格和实验相关事宜请联系:

服务项目联系邮箱:service@genepharma.com; szservice@genepharma.com;

产品项目联系邮箱:support@genepharma.comszsupport@genepharma.com

产品订购联系邮箱:order@genepharma.com; szorder@genepharma.com 


3.RNAi单项服务


1.RNAi 设计服务

成功的RNAi试验设计是您试验成功的前提。吉玛公司专业的设计人员为您提供完整的RNAi试验设计服务。吉玛公司为您提供优化的siRNA,shRNA以及RNAi检测的探针和引物的设计服务。完善的试验设计,精准的靶标以及引物设计让您的试验节省人力和物力。

2.RNAi相关试剂的合成服务

高质量的siRNA,shRNA载体,RNAi检测的探针和引物是保证您试验准确性和可靠性的关键因素,吉玛公司为您提供全套的产品解决方案。

3.RNAi转染优化服务

为了使得您的试验获得最大化的干扰效果,siRNA或者shRNA的转染条件需要优化。RNAi合成试剂的高效的传递条件需要针对具体的细胞进行转染参数的优化。吉玛公司的RNAi 荧光标记的阴性对照可以帮助您进行转染效率的优化。同时吉玛公司阳性对照以及实时定量PCR试剂合可以帮您将转染程序得到最好的优化结果

4.RNAi干扰效果检测服务

我们用实时定量PCR方法检测mRNA水平的基因敲除效果

我们通过Wester blot方法检测蛋白水平的基因敲减效果


目录号 服务项目 价格 交货期
S-01 RNAi 设计服务 询价 2个工作日
S-02 RNAi相关试剂的合成服务 询价 1周
S-03 RNAi转染优化服务 询价 3周
S-04 RNAi干扰效果检测服务 询价 3周

功能介绍与实验实例

目的基因shRNA片段筛选

一、细胞培养
 
人乳腺癌细胞购自中科院上海细胞库,常规培养使用含10% FBS (Gibco)的Leibovitz’s L-15培养基(Gibco)(含1.5 mM L-Glutamine, 100 U/ml penicillin, 100 μg/ml Streptomycin)中,37ºC 100% 空气培养箱中培养。
 
二、目的基因siRNA片段的设计与合成
 
根据目的基因的序列,共选择了5个位点设计shRNA, 。实验所用shRNA的设计由吉玛公司(GenePharma, Shanghai)提供。
 
寡核苷酸的设计
 
shRNA模板中的loop结构选用了TTCAAGAGA以避免形成终止信号,shRNA的转录终止序列采用T6结构。正义链模板的5’端添加了CACC,与BbsI酶切后形成的粘端互补;反义链模板的5’端添加了GATC,与BamHI酶切后形成的粘端互补;如果siRNA的第一个碱基不是G,则在CACC后补加一个G。
 
shRNA模板中的loop结构选用了TTCAAGAGA以避免形成终止信号,shRNA的转录终止序列采用T6结构。正义链模板的5’端添加了CACC,与BbsI酶切后形成的粘端互补;反义链模板的5’端添加了GATC,与BamHI酶切后形成的粘端互补;如果siRNA的第一个碱基不是G,则在CACC后补加一个G。

 

1248 target 

CTGTCAGCCCGAATGGGAA
 
1248S:
 
5-CACCGCTGTCAGCCCGAATGGGAATTCAAGAGATTCCCATTCGGGCTGACAGTTTTTTG-3
 
1248A:
 
5-GATCCAAAAAACTGTCAGCCCGAATGGGAATCTCTTGAATTCCCATTCGGGCTGACAGC-3



结果分析
 
各组细胞转染的图片如下,每一组都是在同一视野下拍摄的,mock表示转染试剂对照,NC表示阴性对照,每一组有两张图,分别为同一个视野下的转染了绿色荧光蛋白的照片和明视野下细胞照片。

24小时后




1, 805干扰组;2, 1222干扰组;3, 1248干扰组;4, 1658干扰组;B,Blank组;M,mock组;N,阴性对照组;K,空载体对照 
从real-time PCR的分析结果可以看到,Mock与空白对照Blank及空载体对照样品基因表达水平接近,实验结果真实可靠。805和1222有较好的干扰效果。

 
一、Western blot法检测RNA干扰效果
 
本实验采用目的基因的单克隆抗体来检测转染48小时后样本的蛋白表达状况。
 

由于该抗体以重组肽段为抗原,在体内,肝素酶是由两个亚基组成的异源二聚体,两个亚基分子量分别约为50kDa和8kDa,组成的肝素酶前体分子量约为65kDa,如图


图8  不同时期的样本蛋白的表达(β-actin作为内参照)
 
注:条带从左至右共8个条带,依次为1. 805干扰组2. 1222干扰组 3. 1248干扰组4 1658干扰组 5. NC  6.Mock  7.Blank  8.空载体

使用方法

使用方法

产品说明书

相关文献

应用实例

订购须知

服务收费标准

目录号

产品名称

价格

交货期限

H02001

RNAi设计服务

询价

2个工作日

H02002

RNAi相关试剂的合成服务

询价

1周

H02003

RNAi转染优化服务

询价

1周

H02004

RNAi干扰效果检测服务

询价

2周

H02005

RNAi稳定细胞株的筛选

询价

2个月

H03001

流式细胞技术检测服务

询价

1周

H04001

细胞周期检测服务

询价

1周

H04002

细胞凋亡检测服务

询价

1周

H04003

细胞活性测定服务

询价

2周

H04004

细胞基质黏附实验服务

询价

1-2周

H04005

细胞侵袭实验服务

询价

1-2周

H04006

细胞免疫荧光实验

询价

1-2周

H04007

细胞免疫吸附实验

询价

1-2周

细胞基质黏附实验服务:CKK-8法进行检测。客户需提供:检测细胞及其培养条件和处理方法。选择观察时间点。检测包括3-5组细胞,每组3个重复。我们提供的结果包括:1细胞黏附情况照片。2(可选)酶标仪检测的原始数据与统计分析结果。具体价格敬请来电咨询。

细胞免疫荧光实验:利用抗原-抗体特异性结合的原理,用经荧光染料标记的抗体对细胞内的蛋白质进行定性或定量研究的方法。流程:细胞爬片 转染或药物处理 固定透化 封闭 一抗孵育 荧光二抗孵育 荧光显微镜观察拍照。客户需要提供荧光一抗及二抗,具体价格敬请来电咨询。

酶联吸附实验(ELISA)4步骤帮您轻松检验各种蛋白大分子抗原:(1)将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。(2)加受检标本,保温反应,去除未结合物质。(3)加酶标抗体,保温反应。固相免疫标抗体结合。(4)加底物显色。服务价格:检测3-5组样品,每组样品3个复孔,具体价格敬请来电咨询。

细胞迁移、侵染实验服务项目:铺有Matrigel的特殊滤膜,正常细胞不能自由穿过。在下室中加入趋化剂,上室加有经过处理的重悬肿瘤细胞,具有侵袭能力的肿瘤细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动,并粘附在滤膜下表面。具体价格敬请来电咨询。

细胞增殖实验使用CCK-8方法: 据活细胞线粒体内的脱氢酶可将试剂中的有效成分转变为有颜色的Formazan,并可被酶标仪检测,间接反应活细胞数量。具体价格敬请来电咨询。(包括4组细胞,每个样品3-5个复孔,客户可以选择检测时间点。)

稳定细胞株筛选服务: 1.抗生素筛选浓度确定(致死曲线):2. 细胞接种:转染实验前天接种细胞。转染时细胞密度达到60%~80%;3. 细胞转染(脂质体)或侵染(慢病毒)4. 利用质粒抗性筛选稳定干扰细胞株;5. 目的基因干扰效果验证。 周期2-3个月,提供T25稳筛细胞株一瓶,具体价格敬请来电咨询。

miRNA靶基因预测双荧光素酶报告系统:吉玛采用promega的psicheck2.0载体系统构建靶基因3‘UTR系统。该系统可检测siRNA/miRNA与靶基因的调控关系,报告荧光(hRluc)验证si/miRNA调控作用,校正荧光(hluc)检测质粒表达效率。另外客户还可选择构建突变UTR系统。具体价格敬请来电咨询。

项目具体价各和实验相关事宜请联系吉玛公司:rnaisupport@genepharma.com,电话:021-51320195-8009。双方协商一致后签订技术服务合同,我们严格按照服务合同开展技术服务。

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